Agenti di biocontrollo: strategie applicative - Vittorio Rossi - AgroNotizie

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Agenti di biocontrollo: strategie applicative - Vittorio Rossi - AgroNotizie
Vittorio Rossi

                                      vittorio.rossi@unicatt.it

Agenti di                 Patogeno        BCA
biocontrollo:
strategie
applicative                Pianta       Ambiente

                                    Bologna, 22 novembre 2019
Agenti di biocontrollo: strategie applicative - Vittorio Rossi - AgroNotizie
Prodotti fitosanitari ‘alternativi’

                           resistenza                   resistenza
                                                                                      proteine, aa
                             indotta         Pianta       indotta      vegetali
  Trichoderma                                                                         oligosaccaridi
 Ampelomyces
Aureobasidium    funghi                                                microbiche cerevisane
       Pythium             Microorganismi              Sostanze
                               (BCA)                    naturali       animali        chitosano
     Bacillus    batteri
                                                                       minerali       rame, zolfo
                                                                                      bicarbonati
                     parassitismo           Patogeno       tossicità
                     antagonismo                            diretta
                     competizione
                                                                     terpeni
                                                       Botanicals
                                                                     oli essenziali
Agenti di biocontrollo: strategie applicative - Vittorio Rossi - AgroNotizie
Trichoderma: principali caratteri

                                          Ife: filamentose,
                                          fortemente ramificate, a
                                          rapida crescita
                                         Fialidi: sono strutture a
                                         forma di fiasco on cui
                                         si formano i conidi

                                         Conidi: di colore
https://en.wikipedia.org/wiki/

                                                                                    M. Jedryczka
                                         verdastro, organi di
                                         propagazione prodotti in
                                         abbondanza
                                                                     T.Q. Qin

                                                                                P. Tang

                                         Clamidospore: organi di
                                         conservazione, capaci
                                         di sopravvivere a lungo
Agenti di biocontrollo: strategie applicative - Vittorio Rossi - AgroNotizie
Trichoderma: metaboliti secondari

Keswani et al., 2013; Applied Microbiology and Biotechnology 98: 533-544.
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Trichoderma: un genere molto complesso

Druzhinina et al., Mycoscience 2006, 47:55-64
Agenti di biocontrollo: strategie applicative - Vittorio Rossi - AgroNotizie
… e molto studiato
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… e molto studiato
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… e molto studiato
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… e molto studiato
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… e molto studiato
… e molto studiato
… e molto studiato
Interazioni pianta – patogeno - BCA
Interazioni pianta – patogeno - BCA

   and
    x
Interazioni pianta – patogeno – BCA

     Ciclo vitale e infettivo
          Stadio bersaglio                                     MoA

                                Patogeno          BCA

                                  Pianta       Ambiente

                                                            Attività del patogeno
                                                            Fitness del BCA
Sfera di competenza del patogeno
           Sfera di colonizzazione
Interazioni pianta – patogeno – BCA

     Ciclo vitale e infettivo
          Stadio bersaglio                                     MoA

                                Patogeno          BCA

                                  Pianta       Ambiente

                                                            Attività del patogeno
                                                            Fitness del BCA
Sfera di competenza del patogeno
           Sfera di colonizzazione
Meccanismi d’azione (MoA): Trichoderma

           Resistenza a        Micoparassiti
           stress abiotici         smo

Induzione della                           Induzione di
   crescita                                resistenza

                                      Competizione
     Endofitismo                      per spazio e
                                        nutrienti

                        Antibiosi
Meccanismi d’azione (MoA): Trichoderma

                         Antibiosi
Meccanismi d’azione (MoA): Trichoderma

Druzhinina et al., 2011; Nature Reviews Microbiology 9:749-759

                                                                                                                    Micoparassitismo

                                                                                                                                              Hubbard et al., 1993; Phytopathology 73:655-659
                                                                 Gupta et al., 2014; Biotechnology and Biology of Trichoderma; Elsevier Ed.
Meccanismi d’azione (MoA): Trichoderma

                                                               ü   vita saprofoba
                                                               ü   adattamento a varie fonti nutrizionali
                                                               ü   elevata fitness
                                                               ü   breve ciclo vitale
                                                               ü   elevati tassi di crescita
                                                               ü   abbondante sporulazione

                                                                             Competizione

Benítez et al., 2004; International Microbiology, 7: 249-260
Martinez-Medina et al., 2013; Frontiers in Plant Science 4(206):206

Induzione di resistenza
                                                                                                                                                 Meccanismi d’azione (MoA): Trichoderma

   Druzhinina et al., 2011; Nature Reviews Microbiology 9:749-759
                                                                                                 Perazzolli et al., 2012; BMC Genomics, 13:660
Interazioni pianta – patogeno – BCA

     Ciclo vitale e infettivo
          Stadio bersaglio                                     MoA

                                Patogeno          BCA

                                  Pianta       Ambiente

                                                            Attività del patogeno
                                                            Fitness del BCA
Sfera di competenza del patogeno
           Sfera di colonizzazione
Il patogeno target

            Inoculo primario

 Forme
                                       Inoculazione
svernanti

                     Sporulazione                     Colonizzazione
                  inoculo secondario                     epifitica

                                  Colonizzazione
                                   endofitica /
                                    infezione
Il patogeno target

                     Inoculo primario

  Forme
                                                Inoculazione
 svernanti

                              Sporulazione                     Colonizzazione
                           inoculo secondario                     epifitica

Quale fase del
ciclo del patogeno                         Colonizzazione
vogliamo                                    endofitica /
controllare?                                 infezione
Il patogeno target

                     Inoculo primario

  Forme
                                                Inoculazione
 svernanti

                              Sporulazione                     Colonizzazione
                           inoculo secondario                     epifitica

Quale fase del
ciclo del patogeno                         Colonizzazione
vogliamo                                    endofitica /
controllare?                                 infezione
Il patogeno target

                       Inoculo primario

                              Competizione
   Forme
                                                   Inoculazione
  svernanti

Parassitismo                     Sporulazione                     Colonizzazione
               Induzione R    inoculo secondario                     epifitica

Quale fase del
ciclo del patogeno                            Colonizzazione
vogliamo                                       endofitica /
controllare?                                    infezione             Competizione
                                                                      Antagonismo
                                                                      Parassitismo
                              Induzione R
                             Competizione
Inoculazione

                                                                        Infezioni latenti
                                                                         delle bacche

               Dispersione                            Penetrazione
                                                       e invasione   Colonizzazione
                                                                      residui fiorali
      Ascospore

                                             Produzione e
                                              dispersione
                                                 conidi

          Apoteci
                                                                                  Muffa grigia
                              Conidi                                              sui grappoli

                   Sclerozi

                                                        Mummie

Muffa grigia
Botrytis cinerea
Infection pathways di B. cinerea

0: Infezione conidica dei grappolini erbacei             Pre-fioritura

I: Infezione conidica di stili e ovuli

IIa: Infezione conidica di stami e petali                Fioritura

IIb: Infezioni latenti

III: Colonizzazione dei residui fiorali
                                                         Pre-invaiatura
IV: Accumulo di conidi nei grappoli in via di sviluppo

V: Infezione conidica durante la maturazione
                                                         Post-invaiatura
VI: Berry-to-berry infection
Infection pathways e difesa

                       BBCH 53       57       65                71          77     81        89

                                                 A                           B     C         D
                                 0           I
                                             I + II       II

                                                      1
                                                          A          IIIIII+ IV
Riduzione della colonizzazione dei residui                                              IV
                                                                     2         B    V + VI
e prevenzione delle infezioni latenti                                                3   D4 D
                                                                                   C
                        Riduzione della colonizzazione
                                            5          dei5                        5         5
                        residui e della sporulazione

                                          Ridurre la sporulazione e prevenire le
                                          infezioni delle bacche

                                                               Prevenire le infezioni delle bacche
Interazioni pianta – patogeno – BCA

     Ciclo vitale e infettivo
          Stadio bersaglio                                     MoA

                                Patogeno          BCA

                                  Pianta       Ambiente

                                                            Attività del patogeno
                                                            Fitness del BCA
Sfera di competenza del patogeno
           Sfera di colonizzazione
Le sfere d’interazione

             Fillosfera

                                        ü   Organi della pianta
                                        ü   Ambiente chimico
                                        ü   Ambiente fisico
                                        ü   Microbioma
                                        ü   Effetti antropici

Caulisfera
                             Residui vegetali

                           Rizosfera
Le sfere d’interazione

 Colonizzazione della rizosfera

     ü Antagonismo verso soil inhabitant
     ü Parassitismo di soil transient
                     Riduzione del potenziale
                     d’inoculo soil-borne
     ü Induzione di resistenza
                     Aumento della resistenza
                     ai patogeni
     ü Effetto nutrizionale e biostimolante
                     Aumento della crescita e
                     della resistenza a stress
                     abiotici
Le sfere d’interazione

 Colonizzazione della caulisfera

     ü Occupazione di nicchie (es tagli di potatura)

                     Prevenzione dell’invasione da
                     parte dei patogeni del legno
Le sfere d’interazione

 Colonizzazione della fillosfera e carposfera

     ü Occupazione di nicchie (es. microferite)
     ü Antagonismo verso microflora epifita
     ü Parassitismo di microflora epifita
                     Riduzione del potenziale
                     d’inoculo epifita
     ü Induzione di resistenza
                     Aumento della resistenza
                     ai patogeni
     ü Effetto biostimolante
                     Aumento della resistenza
                     a stress abiotici
Le sfere d’interazione

 Colonizzazione dei residui vegetali

     ü Occupazione di nicchie per patogeni saprofobi
     ü Parassitismo di forme di conservazione
     ü Riduzione della sporulazione
                     Riduzione del potenziale
                     d’inoculo air- e spash-borne
Interazioni pianta – patogeno – BCA

 Ciclo vitale e infettivo                                 MoA
      Stadio bersaglio

                            Patogeno          BCA

                              Pianta       Ambiente

      Sfera d’infezione                                   Infezione
Sfera di colonizzazione                                   Fitness del BCA
Ambiente e BCA

                                  Temperatura
                   0   5    10   15   20   25   30   35   40

Botrytis cinerea                                          54-100 (100)% RH

       Candida                                            90-100 (100)% RH

Aureobasidium

       Bacillus

   Trichoderma                                            60-100 (100)% RH

   Papiliotrema

      Alternaria                                          95-100 (100)% RH

   Rhodotorula                                            94-100 (100)% RH

  Clonostachys

                                                                Fedele et al. 2019, Submitted
Ambiente e BCA

                         1,40E+09
                                     Temperatura (°C)                                                    Dinamica delle UF di Trichoderma
                         1,20E+09
                                                                                                           in rapporto alla temperatura e
Unità formanti colonie

                         1,00E+09
                                                                                                           umidità relativa successiva al
                         8,00E+08
                                                                                                                    trattamento
                         6,00E+08

                         4,00E+08
                                                                                                         1,60E+09
                         2,00E+08                                                                                    Umidità relativa (%)
                                                                                                         1,40E+09
                         0,00E+00

                                                                                Unità formanti colonie
                                                                                                         1,20E+09
                                         0    1       3         6     10   13
                                              Giorni dopo il trattamento                                 1,00E+09
                                                                                                         8,00E+08
                                    15       20     25       30       35
                                                                                                         6,00E+08
                                                                                                         4,00E+08
                                                                                                         2,00E+08
                                                                                                         0,00E+00
                                                                                                                         0        1       3         6     10   13
                                                                                                                                  Giorni dopo il trattamento

                                                                                                                    60       80        90       95       100
Nicchie ambientali

Nicchie ambientali:
ü definite come le condizioni ambientali necessarie per la presenza di una
   specie e il mantenimento della sua popolazione (Chesson et al., 2001).
ü ampiamente usate in ecologia, non in fitopatologia.

Le nicchie ambientali possono essere definite per qualsiasi patogeno e BCA,
considerando gli intervalli di temperatura e umidità in cui la crescita è:
- nulla (no growth); score 0,
                                                100
- minimale (20-50%); score 2,                                    4

                                            Relative humidity (%)
                                                  90
- considerevole (>50-80%); score 3,                           3
- massimale (>80%); score 4.                      80

                                                                    70
                                                                                     2
                                                                             1
                                                                    60
                                                                             0
                                                                    50
                                                                         0       5       10    15 20 25 30       35   40
                                                                                              Temperature (°C)
Nicchie ambientali

                        100

                        90
                                                   4
Relative humidity (%)

                                                                                                                         4
                        80
                                                                                                                    3
                        70
                                         3                                                                      2
                                                                                                            1
                        60
                                    2        B. cinerea
                                  0 1                                                                   0           Trichoderma
                        50
                              0    5    10    15   20   25      30   35                       40
                                             Temperature (°C)                                 100
                                                                                                                2 3      4
                                                                                                        1
                                                                                              90
                                                                      Relative humidity (%)

                                                                                                        0
                                                                                              80

                                                                                              70

                                                                                              60
                                                                                                                        Candida
                                                                                              50
                                                                                                    0       5   10       15 20 25 30       35   40
                                                                                                                        Temperature (°C)
Nicchie ambientali

                                                                                                                                                                           100
                        100                                                                                                                                                100
                                                                                                                                                                            90

                                                                                                                                                                 (%) (%)
                        90
                                                   4                                                                                                                       90

                                                                                                                                                            humidity
Relative humidity (%)

                                                                                                                                                                           80
                                                                                                                               4
                        80

                                                                                                                                                        humidity
                                                                                                                                                                           80
                                                                                                                           3                                               70

                                                                                                                                                   Relative
                        70
                                         3                                                                             2                                                   70
                                                                                                                                                                           60

                                                                                                                                               Relative
                                                                                                               1
                        60
                                    2        B. cinerea                                                                                                                    60                                           A
                                  0 1                                                                      0               Trichoderma                                     50
                        50                                                                                                                                                       0   5     10   15 20 25 30        35 A40
                                                                                                                                                                           50                   Temperature (°C)
                              0    5    10    15   20   25      30   35             40                                                                                           0   5     10   15 20 25 30        35   40
                                                                                    100                                                                                    100                  Temperature (°C)
                                             Temperature (°C)
                                                                                                                       2 3     4
                                                                                      100 1                                                                                100
                                                                                     90                                                                                     90

                                                                                                                                                                 (%) (%)
                                                                         Relative humidity (%)

                                                                                            90
                                                                                                           0                                                               90            1.0
                                                                      Relative humidity (%)

                                                                                                                                                           humidity
                                                                                          80                                                                               80
                                                                                                                                                                                         0.8
                                                                                            80

                                                                                                                                                        humidity
                                                                                                                                                                           80
                                                                                          70                                                                               70            0.5

                                                                                                                                                  Relative
                                                                                            70                                                                             70
                                                                                          60
                                                                                                                                                                                         0.2

                                                                                                                                               Relative
                                                                                                                                                                           60
                                                                                            60
                                                                                                                               Candida                                                   0.0
                                                                                                                                                                        60                                              B
                                                                                          50
                                                                                                                                                                      A50                                               B
                                                                                            500                5       10     15 20 25 30 35                          4050 0         5     10   15 20 25 30        35   40
                                                                                                                             Temperature (°C)                                                   Temperature (°C)
                                                                                                       0           5       10 15 20 25 30 35                                40 0     5     10   15 20 25 30        35   40
                                                                                                                                Temperature (°C)                                                Temperature (°C)

                                                                                                 100

                                                                                                 90                                                                                      1.0
                                                                                  )
Nicchie ambientali

                        100

                        90
                                                   4
Relative humidity (%)

                                                                                                                         4
                        80
                                                                                                                    3
                        70
                                         3                                                                      2
                                                                                                            1
                        60
                                    2        B. cinerea
                                  0 1                                                                   0           Trichoderma
                        50
                              0    5    10    15   20   25      30   35                       40
                                             Temperature (°C)                                 100
                                                                                                                2 3      4
                                                                                                        1
                                                                                              90
                                                                      Relative humidity (%)

                                                                                                        0
                                                                                              80

                                                                                              70

                                                                                              60
                                                                                                                        Candida
                                                                                              50
                                                                                                    0       5   10       15 20 25 30       35   40   0   5   10   15 20 25 30        35   40
                                                                                                                        Temperature (°C)                          Temperature (°C)
Interazioni pianta – patogeno – BCA

 Ciclo vitale e infettivo                                 MoA
      Stadio bersaglio

                            Patogeno          BCA

                              Pianta       Ambiente

      Sfera d’infezione                                   Infezione
Sfera di colonizzazione                                   Fitness del BCA
Interazioni pianta – patogeno – BCA

  ü Condizioni ambientali e infezione;
  ü MoA dei BCA;
  ü timing dell’applicazione dei BCA (preventiva vs
    curativa);
  ü Condizioni ambientali e BCA.

                                     Fedele et al. 2019, Submitted
BBR control & BCAs: a simulation model

                           … in diverse condizioni
                           climatiche …

  ü Condizioni ambientali e infezione;
  ü MoA dei BCA;
  ü timing dell’applicazione dei BCA (preventiva vs
    curativa);
  ü Condizioni ambientali e BCA.

                                     Fedele et al. 2019, Submitted
BBR control & BCAs: a simulation model

Le esigenze ambientali del BCA giocano un ruolo
prevalente sull’efficacia di controllo, e contano per
> 90% della variabilità delle simulazioni.

       Strains with diverse growth conditions or survival capabilities

                                                      Fedele et al. 2019, Submitted
In conclusione … o … per iniziare

Prodotti di grande interesse sia in biologico che in produzione integrata
    ✔ Strategie anti-resistenza
    ✔ Tempi di carenza
    ✔ Profilo tossicologico
In conclusione … o … per iniziare

Prodotti di grande interesse sia in biologico che in produzione integrata
    ✔ Strategie anti-resistenza
    ✔ Tempi di carenza
    ✔ Profilo tossicologico

Servono maggiori conoscenze
    ✔ Meccanismi d’azione
    ✔ Efficacia e persistenza d’azione
    ✔ Condizioni d’impiego
    ✔ Inserimento nelle strategie di difesa
In conclusione … o … per iniziare

Prodotti di grande interesse sia in biologico che in produzione integrata
    ✔ Strategie anti-resistenza
    ✔ Tempi di carenza
    ✔ Profilo tossicologico

Servono maggiori conoscenze
    ✔ Meccanismi d’azione
    ✔ Efficacia e persistenza d’azione
    ✔ Condizioni d’impiego
    ✔ Inserimento nelle strategie di difesa

Serve ttrasferimento efficace
    ✔ Prodotto giusto, al momento giusto, in rapporto al target, alla strategia
       di difesa e alle condizioni ambientali
Grazie per l’attenzione
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