Dal DNA alle proteine: La trascrizione e la traduzione
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Trascrizione Sintesi di RNA a partire da uno “stampo” di DNA. • Ci sono diversi tipi di RNA: E’ l’unico che m-RNA o “messaggero” viene tradotto in proteine t-RNA o “transfer” r-RNA o “ribosomale” snRNA, miRNA, ecc., “piccoli RNA”
Com’è organizzata un’unità trascrizionale? Nei procarioti: Terminatore Sito d’inizio trascrizione PROMOTORE GENE 1 GENE 2 GENE 3 Unità di trascrizione Regola l’inizio della Negli Eucarioti trascrizione Sito d’inizio trascrizione Terminatore PROMOTORE 5’UTR ESONE 1 INTRONE ESONE 2 INTRONE 3’UTR Unità di trascrizione Gene Eucariotico
Trascrizione Consiste in tre passaggi – Inizio: attacco della RNA polimerasi a specifiche regioni del DNA: promotori (nei procarioti) – attacco della RNA polimerasi a fattori di trascrizione (proteine) legate a regioni del DNA: promotori (negli eucarioti) – Allungamento: sintesi di una catena di RNA a partire dall’estremità 3’ del DNA stampo mediante aggiunta di un nucleotide alla volta – Termine: distacco della molecola di RNA neosintetizzata, trascritta, quando la RNA pol incontra sul DNA altre sequenze specifiche: terminatori
La TRASCRIZIONE è operata da specifici enzimi, RNA Polimerasi, che: • Riconoscono specifici siti (sequenze di basi) sul DNA (promotori) (direttamente o indirettamente) • Operano in direzione 5’ 3’ sulla molecola di DNA stampo • Aggiungono un nucleotide alla volta seguendo il principio di complementarietà delle basi dettato dal DNA stampo
3 RNA polimerasi negli Eucarioti 1 nei Procarioti Trascritto Tipo Localizzazione cellulare 18S,5.8S, 28S I Nucleolo rRNA II Nucleo mRNA e snRNA tRNA e 5S III Nucleo rRNA
Inizio della trascrizione negli eucarioti • La RNA polimerasi non riconosce direttamente il promotore, ma l’interazione è mediata da fattori di trascrizione Cambell, Reece Biologia ZANICHELLI
Trascrizione la sequenza di RNA è complementare al filamento stampo RNA polymerase identica al filamentomakes RNA che codifica template strand 1. coding strand 2. 3. nucleotide substitution
Maturazione dell’mRNA (eucarioti) • L’RNA trascritto, pre-mRNA, deve essere modificato prima di abbandonare il nucleo della cellula eucariotica
Maturazione dell’mRNA (eucarioti) 1. Aggiunta in 5’ di una G met: Capping Cambell, Reece Funzioni: Biologia ZANICHELLI Protegge l’mRNA dalla degradazione Funge da segnale di attacco ai ribosomi
Maturazione dell’mRNA (eucarioti) 2. Aggiunta in 3’ di una coda di poly A: poliadenilazione Cambell, Reece Biologia Funzioni: ZANICHELLI Protegge l’mRNA dalla degradazione Da 50 a 250 nucleotidi adenilici
Maturazione dell’mRNA (eucarioti) 3. Rimozione delle sequenze non codificanti (introni) e unione delle sequenze codificanti (esoni): splicing
Come avviene lo splicing? • snRNP riconoscono le terminazioni degli introni ed unitamente ad altre proteine formano una struttura chiamata spliceosoma • Lo spliceosoma rimuove gli introni ed unisce fra loro gli esoni Cambell, Reece Biologia ZANICHELLI
Gli Introni presentano sequenze conservate
Funzione dello splicing? Meccanismo di regolazione dell’espressione genica
Splicing Alternativo: Da un singolo gene più proteine
L’mRNA mautro va incontro alla traduzione
I Conti non tornano!! Come si passa da un codice a 4 lettere ad uno a 20 lettere?
Il “CODICE GENETICO” Poiché abbiamo 4 basi azotate che compongono il DNA e 20 aminoacidi diversi in natura. Quante basi servono per codificare un a.a.? 1 base 4 possibilità 2 basi 42 = 16 possibilità 3 basi 43 = 64 possibilità
Negli anni ’60 vennero tradotti tutti i 64 codoni Cambell, Reece Biologia ZANICHELLI
Codice Genetico: caratteristiche • UNIVERSALE Uguale in tutti gli esseri viventi, eccezione DNA mitocondriale • DEGENERATO 4 nucleotidi combinati 3 a 3 originano 64 combinazioni: 1 aa sarà pertanto codificato da più di una tripletta • NON AMBIGUO 1 tripletta codifica per 1 solo aa • COLINEARE fra sequenza di nucleotidi sull’mRNA e la sequenza aa di una proteina
Traduzione o sintesi proteica • Avviene nel citoplasma sui ribosomi liberi o collegati al RER (reticolo endoplasmico rugoso) • L’mRNA viene letto in direzione 5’ 3’ • Sono richiesti 3 tipi di RNA: – Messaggero (mRNA) – Di trasporto/transfer (tRNA) – Ribosomiale (rRNA) • Si articola in tre fasi: inizio, allungamento, termine • Richiede energia
t-RNA FUNZIONE: TRASPORTA GLI AMINOACIDI FINO AI RIBOSOMI 2 siti importanti: 1) ANTICODONE: sequenza di 3 basi che si appaia al corrispettivo CODONE sull’ m-RNA 2) Sito di legame per l’aminoacido
Aminoacil-t-RNA sintetasi Ce ne sono 20 come il numero degli aminoacidi Cambell, Reece Biologia ZANICHELLI
Ribosomi RIBOSOMA: sito dove avviene la sintesi delle proteine • Sono costituiti da due subunità (maggiore e minore) • Ogni subunità costituita da •r-RNA • proteine si assemblano nel nucleo Le due subunità si uniscono solo dopo che hanno preso contatto con l’mRNA Cambell, Reece Biologia ZANICHELLI
Inizio Purves, Sadava, Orians Heller Biologia e Genetica ZANICHELLI
Allungamento Purves, Sadava, Orians Heller Biologia e Genetica ZANICHELLI
Termine Purves, Sadava, Orians Heller Biologia e Genetica ZANICHELLI
Maschi XY e Femmine XX • Nelle femmine solo uno dei due chr X viene trascritto e tradotto. L’altro viene inattivato. • Questo processo, che prende il nome di Inattivazione del chrX, serve per eguagliare I livelli di espressione dei geni sul chrX fra maschi e femmine (compensazione del dosaggio genico).
Inattivazione del cromosoma X nelle femmine: lyonizzazione Zigote Prime fasi di divisione cellulare Inattivazione di una delle 2 X Mosaicismo delle cellule somatiche
Corpo di Barr – è la cromatina condensata della X inattiva • Femmine normali hanno 1 corpo di Barr • Maschi con una X sovrannumeraria (47,XXY) hanno un corpo di Barr • Il numero dei corpi di Barr è sempre uno meno il numero delle X presenti nella cellula
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