Osservazioni sulla resistenza agli antimicrobici di enterobatteriacee isolate da uccelli da gabbia e da voliera.
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UNIVERSITÀ DEGLI STUDI DI MILANO
C O RS O D I L A U R E A I N M E D I C I N A V E T E R I N A R I A
D I PA R T I M E N TO D I M E D I C I N A V E T E R I N A R I A
Osservazioni sulla resistenza agli
antimicrobici di enterobatteriacee isolate da
uccelli da gabbia e da voliera.
Relatore: Dott. Guido Grilli Tesi di laurea di: Lorenzo Bassi
Correlatore: Dott.ssa Camilla Calligarich Matricola: 817169
Introduzione
Scopo della tesi
• Determinare le specie di Enterobacteriaceae commensali
negli uccelli d’affezione.
• Valutare la resistenza agli antimicrobici dei ceppi isolati.
• Fornire spunti di ricerca in relazione a queste specie, considerata
la scarsa bibliografia.
Canarino Ara gialloblu
(Serinus canaria) (Ara ararauna)
Introduzione
Perché?
Introduzione
Perché?
• In Italia si stimano oltre 12 milioni di
pet-bird distribuiti tra allevamenti e
proprietari (FEDIAF, 2014).
• Contatti anche diretti con tutto il nucleo
famigliare, con persone di qualsiasi età.
• Dispersione di batteri fecali in ambiente
domestico inevitabile.
• Terapie “empiriche” e senza
prescrizione, anche con farmaci
antimicrobici ad uso umano.
Introduzione
Allevamento e detenzione
• Federazione Ornicoltori Italiani (FOI) e associazioni territoriali:
20.000 allevatori, registro nazionale, eventi e divulgazione.
• Legge-quadro sulla caccia (n.157/1992) e convenzione CITES
(Reg. CE n.338/97).
Cenerino
(Psittacus erithacus)
• Specie di libera detenzione e commercio.
(sx) Diamante di Gould
(Erythrura gouldiae)
(dx) Cocorita
(Melopsittacus undulatus)
Introduzione
Specie più diffuse
Passeriformes Psittaciformes
Ciuffolotto Canarino Cardellino Cenerino Ara gialloblu Amazzone fronte gialla
(Pyrrhula pyrrhula) (Serinus canaria) (Carduelis carduelis) (Psittacus erithacus) (Ara ararauna) (Amazona ochrocephala)
Diamante di Gould Diamante mandarino Passero del Giappone Inseparabile faccia rosa Calopsitta Cocorita Parrocchetto dal collare
(Erythrura gouldiae) (Teniopygia guttata) (Lonchura striata domestica) (Agapornis roseicollis) (Nymphicus hollandicus) (Melopsittacus undulatus) (Psittacula krameri)
Introduzione
Microbioma intestinale delle specie aviarie
• Microbioma: «Insieme del patrimonio genetico e delle interazioni
ambientali della totalità dei microorganismi di un ambiente definito»
(Turnbaugh, 2007).
• Il microbioma intestinale aviare è determinato dalla specie ospite,
dall’ambiente, dall’età e dell’alimentazione.
• Enterobatteriaceae spesso presenti ma non predominanti. Hanno ruolo
primario nella generazione e trasmissione della resistenza agli
antimicrobici. Sono inoltre indicatori di antibiotico-resistenza secondo
la direttiva CE 99/2003.
Introduzione
Principali enterobatteriacee nelle specie aviarie
• Escherichia coli
• Salmonella spp.
• Yersinia enterocolitica
• Shigella spp
Serratia marcescens (Agar MacConkey) Shigella spp. (Agar MacConkey)
• Citrobacter freundii
• Serratia spp.
• Proteus spp.
Escherichia coli (Agar MacConkey)
Introduzione
Antibiotico-resistenza: origine e trasmissione
• Capacità dei batteri di resistere all’azione delle sostanze
antimicrobiche, naturale o acquisita.
• Mutazione e selezione di ceppi resistenti.
• Trasmissione della resistenza tramite ricombinazione: trasduzione,
trasformazione e coniugazione.
• Particolare rilevanze del plasmide R nelle Enterobacteriaceae.
Introduzione
Antibiotico-resistenza: situazione attuale
• Sono stimate 700.000 morti l’anno dovute all’antibiotico-resistenza
(O’Neill, 2016).
• Importanza fondamentale dei farmaci antimicrobici: un utilizzo
consapevole è essenziale.
• Conseguenze del passato e nuove sfide.
• Le specie aviarie sono coinvolte nello sviluppo e nella diffusione
dell’antibiotico-resistenza.Materiali e metodi
Raccolta dei campioni
• Raccolta di materiale fecale fresco da uccelli asintomatici, con fogli
di alluminio.
• Campionamenti da pet-bird, allevamenti e un negozio di animali.
Esemplari campionati erano esenti da trattamento antibiotico da
almeno 6 mesi.
• 64 campionamenti da passeriformi e psittaciformi: 23 pet-bird,
28 pool da allevamenti e 13 da negozio di animali.
Canarino, campionamento in corso.
• Conservazione dei campioni sigillati a temperatura di refrigerazione.Materiali e metodi
Colture batteriche
...
Agar MacConkey Mueller Hinton Agar
Acqua sterile
Campione fecale
Terreno di arricchimento
(BHI)Materiali e metodi
Identificazione di specie
... ...
• RapID ONE è un sistema qualitativo miniaturizzato
che utilizza convenzionali substrati cromogeni per
l’identificazione di Enterobacteriaceae di rilevanza
clinica ed altri bacilli Gram-negativi.Materiali e metodi
Antibiogrammi
Classi testate: Antimicrobico Dose disco Sigla
Aminoglicosidi Apramicina 15 µg APR
Neomicina 10 µg N
Streptomicina 25 µg S
Ciprofloxacina 5 µg CIP
Chinoloni Enrofloxacina 5 µg ENR
Levofloxacina 5 µg LEV
Flumequina 30 µg UB
Polipeptidi Colistina solfato 25 µg CT
... Tecnica di Kirby-Bauer Polimixina B 300 U PB
Sulfamidici Cotrimossazolo 25 µg SXT
Triple-sulfa 300 µg S3
Tetracicline Doxiciclina 30 µg DO
Tetraciclina 10 µg TE
β Lattamici
Amoxicillina e ac. clavulanico 30 µg AMC
Cefalosporine Cefotaxime 30 µg CTX
Ceftazidime 30 µg CAZ
Fenicoli Cloramfenicolo 30 µg C
Florfenicolo 30 µg FFCRisultati e discussione
Specie aviarie campionate
Canarino (Serinus Canaria)
Diamante fetonte (Neochmia phaeton)
Diamante di Kittlitz (Erythrura trichroa)
Cappuccino tricolore (Lunchura malacca)
17 da Passeriformes Cardinalino del venezuela (Spunus cucullata)
Cardellino (Carduelis carduelis)
(8 specie) Diamante di Gould (Erythrura gouldiae)
Passero del Giappone (Lonchura striata domestica)
64 Campioni 41 Isolamenti Parrocchetto dal collare (Psittacula krameri)
Parrocchetto ali cremisi (Aprosmictus erythropterus)
Cocorita (Melopsittacus undulatus)
Parrocchetto alessandrino (Psittacula eupatria)
Groppone rosso (Psephotus haematonotus)
24 da Psittaciformes Parrocchetto capinero (Pyrrhura rupicola)
Pappagallino del pacifico (Forpus coelestis)
(14 specie) Cenerino (Psittacus erithacus)
Calopsitta (Nymphicus hollandicus)
Rosella orientale (Platycercus eximius)
Rosella cremisi (Platycercus elegans)
Inseparabile faccia rosa (Agapornis roseicollis)
Amazzone fronte gialla (Amazona ochrocephala)
Conuro del sole (Aratinga solstitialis)Risultati e discussione
Ceppi batterici isolati
Altri • Massima prevalenza per Y. enterocolitica, solitamente
Yersinia è inferiore ma è già stata osservata oltre il 20% (Kato,
enterocolitica 1985). Prevalentemente da pet-bird e per specie da
cocorite.
Escherichia spp. • Ceppi di Shigella spp. distribuiti casualmente tra classi.
Probabilmente ceppi non patogeni per gli uccelli e
dunque per l’uomo.
Acinetobacter
cacloaceticus
• C. freundii e Serratia spp. si confermano parte del
microbioma fecale: entrambi potenziali opportunisti.
Shigella spp.
Serratia spp.
• E. coli dalla bassa prevalenza come già indicato da altri
studi (Alcaraz, 2016). A. calcoaceticus non appartiene
Citrobacter alle Enterobacteriaceae, già osservato negli uccelli.
freundiiRisultati e discussione
Esito degli antibiogrammi
• Il 65,2% dei ceppi è
multiresistente, solo 2 ceppi sono
Categorie EUCAST in base al breakpoint clinico: Resistente Intermedio Sensibile
totalmente sensibili.
• In confronto alla scarsa letteratura,
il risultato è prossimo ai livelli
massimi riportati (Giacopello,
2016).
• Resistenze distribuite tra esemplari
d’allevamento e pet-bird.
• Probabile causa: utilizzo
indiscriminato degli antimicrobici
durante l’allevamento.Risultati e discussione
Esito degli antibiogrammi
Resistente Intermedio Sensibile
Levofloxacina: R 8% I 8% S 84% Apramicina: R 30% I 3% S 67% Ceftazidime: R 65% I 8% S 27%
Buona efficacia Efficacia ridotta Scarsa efficacia
Simili: ciprofloxacina, doxiciclina Simili: altri aminoglicosidi, Simili: cefotaxime, tetraciclina.
cloramfenicolo. enrofloxacina, flumequina,
sulfamidici, polipeptidi.Risultati e discussione
Resistenze di Yersinia enterocolitica
Resistente Intermedio Sensibile
Levofloxacina: R 10% I 20% S 70% Ceftazidime: R 80% I 10% S 10%
• Mediamente, la resistenza dei ceppi è maggiore rispetto • Rischio potenziale: grande utilità di un’indagine
al gruppo complessivo. del sierotipo per determinare la patogenicità dei
ceppi.
• Resistenze non ritrovate in ceppi di Y. enterocolitica
contaminanti l’ambiente (Bonardi, 2010).Risultati e discussione
Resistenze di Shigella spp.
Resistente Intermedio Sensibile
Florfenicolo: R 4/8 I 1/8 S 3/8
• Mediamente, la resistenza dei ceppi è minore rispetto al
gruppo complessivo.
• Presenza di sensibilità che mancano in uccelli che vivono
all’aperto (Abo-Amer, 2015).Risultati e discussione
Resistenze di Citrobacter freundii.
Resistente Intermedio Sensibile
Colistina solfato: R 4/5 I 0/5 S 1/5
• Pochi ceppi isolati per considerazioni approfondite, tuttavia
marcata resistenza alla colistina solfato, farmaco salva vita in
medicina umana.Conclusioni
Considerazioni finali
• Gli uccelli da gabbia e da voliera sono portatori di enterobatteriacee
con alti livelli di antibiotico resistenza: rischio diretto a causa
eventuali patogeni e indiretto per via dei ceppi innocui.
• Ruolo fondamentale del Medico Veterinario anche in queste specie,
per ogni tipo di trattamento, secondo il principio di One Health.
• Nota positiva: totale assenza di Salmonella spp., probabilmente per
un risanamento degli esemplari da anni allevati in cattività.
• Ulteriori studi che sfruttano la biologia molecolare sarebbero
interessanti per descrivere i geni di resistenza e la loro possibile Pappagallo del Senegal (Poicephalus senegalus).
trasmissibilità.Grazie per l’attenzione
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