MICROBIOTA E DISBIOSI - Il laboratorio e le più comuni Patologie da DISBIOSI - Webinar Giovedì 16.04.2020 - Slam Formazione
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MICROBIOTA E DISBIOSI
Il laboratorio e le più comuni Patologie da DISBIOSI
Webinar Giovedì 16.04.2020
ore 17.oo-19.oo Mauro Mario Amato
GUT MICROBIOTA in Eubiosi
- Dieta ricca in fibre
- Apporto moderato
grassi e proteine
- Stile di vita
Sviluppo e modulazione adeguato e regolare
Sintesi vitamine
sistema immunitario - Probiotici
Modulazione Integrità barriera
asse intestino-cervello intestinale
Angiogenesi
intestinale
Metabolismo lipidico
Produzione acidi grassi Antiossidanti
a catena corta (SCFA) Ac. Indolo3-propionico (IPA)
Citokine (azione neuroprotettiva)
(infiammazione)
Sensibilità insulinica
Mauro Mario Amato
All Rights Reserved
GUT MICROBIOTA in Disbiosi
- Dieta ricca zuccheri
e acidi grassi saturi
- Consumo eccessivo
di proteine Riduzione progressina anaerobi
- Alterazione pH
- Antibiotici e inibitori
di pompa protonica
Integrità barriera intestinale
Permeabilità intestinale
Produzione acidi grassi
a catena corta (SCFA)
(fermentazione delle fibre)
Rischio Rischio CVD
MICI/IBS
Resistenza insulinica Citokine Produzione Lipopolisaccaridi
(infiammazione Produzione TMA
(patologie associate) (trimetilannina)
intestinale)
Antiossidanti
Declino cognitivo Metabolismo lipidico Mauro Mario Amato
All Rights Reserved
Mauro Mario Amato
All Rights Reserved
Dieta
- Alimentazione e Sazietà
- Metabolismo Gluco-lipidico
- Sensibilità insulinica
- Adiposità
REGOLAZIONE MICROBICA
DEL METABOLISMO
Microbiota (Ormoni enterici)
GLP-1 (Glucagon-like peptide 1)
PYY (Peptide tyrosine-tyrosine)
Metaboliti batterici 5-HT (Serotonina)
SCFA (Ac. grassi catena corta) GIP (Glucose-dependent insulinotropic peptide)
Componenti strutturali CCK (Cholecystokinin)
Acidi biliari secondari
Enterociti endocrini
Rilasciato post-prandium a livello di ileo/colon in ORMONI
risposta a nutrienti, come il glucosio, per aumentare
l'insulina e inibire la secrezione di glucagone.
INTESTINALI Mauro Mario Amato
All Rights Reserved
Inibisce lo svuotamento gastrico e influenza
sazietà e assunzione di cibo
Rilasciato insieme al GLP1 regola assunzione
di cibo e sazietà attraverso l'attivazione dei
recettori Y2 nel nucleo arcuato ipotalamico
GLP-1 (Peptide1 Glucagone simile) Prodotta dalle cellule enterocromaffini (EC circa il
50% delle entero-endocrine) rappresenta il 95 %
della serotonina all'interno del corpo.
PYY (Peptide tirosina-tirosina) Le EC sono disperse su tutta la lunghezza del tratto
gastrointestinale e svolgono azioni importanti
5-HT (Serotonina) associate alla motilità rilevando l’ambiente
nutriente locale e secernendo serotonina.
GIP (Peptide Insulinotropico glucosio-dipendente)
CCK (Colecistochinina) E’ una incretina con azione simile al GLP1
rilasciata post-prandium dagli enterociti
endocrni K dell’intestino tenue.
E’ stato notato che un suo incremento sia
Prodotta prevalentemente intestino tenue superiore associato all’aumento di adiposità
in risposta al grasso alimentare e apporto proteico.
Ruoli ben definiti nella regolazione dell’appetito,
svuotamento gastrico, motilità e rilascio
di acidi biliari e pancreatici
Microbioma e Metabolismo
attraverso gli ormoni intestinali
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6477058/
Biotina Anticorpo marcato
Superfici coattate Schema di base del
con Streptavidina
antigene Principio di Azione
Tecniche Immunochimiche
Anticorpo Proteine
Antigene Peptidi
di cattura Steroidi Prodotti
biotininati Farmaci
adesi su Ammine
da dosare Marcatore
superficie
Isotopi (RIA, IRMA)
Biotina Sostanze fluorescenti (FIA, FPIA, MEIA)
Anti-anticorpo marcato
Sostanze luminescenti (CLIA, LIA)
antigene Enzimi (ELISA)
Proteine Anticorpi/Auto-anticorpi
Peptidi
Steroidi
da dosare
Farmaci
Ammine
Mauro Mario Amato
substrato All Rights Reserved
enzima Legenda
anticorpo secondario
RIA= Radio Immuno Assay
marcato IRMA= Immunoradiometric Assay
anticorpo primario
marcato FIA= Fluorescent Immuno Assay
antigene
FPIA= Fluorescent Polarized Immuno Assay
Test Diretto MEIA= Microparticle Enzyme Immuno Assay
Test Indiretto
CLIA= Chemi Luminescent Immuno Assay
LIA= Luminescent Immuno Assay
ELISA= Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
ELISA= Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
anticorpo Test di Cattura
di cattura (sandwich)
DISBIOSI
Acidi grassi a catena corta Acetato (circa 50%)
fecali (Fecal SCFA) 90-95% Propionato (circa 20%)
(HPLC-MS)
(fermentazione delle fibre) High-Performance Liquid
Butirrato (circa 20%) Chromatography
Mass Spectrometry
campione feci
- Il consumo di fibre favorisce la crescita di batteri urine
sani come Lattobacilli, Bifidobatteri e Prevotella trattamento
inibendo la proliferazione
IL-1 di E.coli e Salmonella
Citochine
benefico sulla TNF
spettro di azione su grande varietà di cellule/tessuti Immunochimica
- Ruolo
infiammatorie primarie
permebilità intestinale
IL-6 molecola responsabile della produzione di proteine di fase acuta
aumentano la diversità delle specie batteriche Gas-cromatografia
- Capacità di inibire la produzione citochine
pro-infiammatorie
Resistenza come NF-κΒ,
Anticamera per il IFN-y
diabete e TNF-α
- Insulina
Insulinica immunochimica
- Curva Insulinemica da carico orale di glucosio
- Attività antitumorale con modulazione della
HDAC (Istone Deacetilasi) e inibizione della - Indice HOMA-IR
proliferazione cellulare e apoptosi. equazioni matematiche - Indice QUICKI e OGIS
- Nelle MICI evidenziata
Lipopolisaccaridi scarsadella
Componenti produzione
parete esterna dei gram- (Lipide A
enterobatteri ) attivanti l’infiammazione
Endotossine
di butirrato disbiosi-dipendente
- Test pirogeno del coniglio (test in vivo)
- Test del Limulus (capacità del lisato di amebociti dell’emolinfa di gelificare in presenza di piccolissime quantità di endotossina
- Test cromogenico (lisato modificato di Limulus e substrato cromogeno )
Mauro
- ELISA test (immunoenzimatizo basato sul dosaggio delle Mario Amato
LPS)
All Rights Reserved
Ruolo chiave SCFAs
metabolismo locale, intermedio e periferico
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4939913/
Ruolo chiave dei SCFAs
dialogo Intestino-Cervello
Mauro Amato
https://www.nature.com/articles/s41575-019-0157-3Effetti benefici SCFAs
Metabolismo e salute CVD
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6244749/DISBIOSI
(HPLC-MS)
TMA trattamento High-Performance Liquid
Chromatography
(trimetilamina) campione Mass Spectrometry
feci Dosaggio
plasma
fegato
Flavina Monoossigenai 3
TMAO Immunochimica
(trimetilamina-Ossido)
- TMAO prodotto dal metabolismo batterico intestinale
durante la digestione della colina, lecitina e carnitina
presenti nelle carniIL-1
rosse, fegato, uova e altri prodotti
animali.
Citochine TNF spettro di azione su grande varietà di cellule/tessuti Immunochimica
L’aumentato
infiammatorie primarieconsumo
IL-6favorisce molecola
lo sviluppo di flora
responsabile della produzione di proteine di fase acuta
TMAO produttore (Proteus, Desulfovibrio, Klebsiella)
- L’aumento della concentrazione è aterogenica e
Resistenza Anticamera per il diabete
correlata non solo alle CVD e Ictus ma anche alla - Insulina
Insulinica
Sindrome Metabolica
immunochimica
- Curva Insulinemica da carico orale di glucosio
- Indice HOMA-IR
- Aumento concentrazione TMAO siequazioniassocia anche alle
matematiche
- Indice QUICKI e OGIS
malattie renali, al Diabete tipo 2 alla morte precoce
per qualsiasi causaComponenti della parete esterna dei gram- (Lipide A
Lipopolisaccaridi
enterobatteri ) attivanti l’infiammazione
Endotossine
- Evidenziato dosaggio triplicato nei i soggetti con
dieta
- Test riccadeldiconiglio
pirogeno carne(test
rossa rispetto alla dieta ricca di
in vivo)
carni
- Test delbianche o proteine
Limulus (capacità perdivegetali.
del lisato amebociti dell’emolinfa di gelificare in presenza di piccolissime quantità di endotossina
- Test cromogenico (lisato modificato di Limulus e substrato cromogeno )Mauro Mario Amato
- ELISA test (immunoenzimatizo basato sul dosaggio delle LPS) All Rights ReservedCorrelazone diretta
TMAO/Eventi CVD avversi maggiori
TMAO/Disturbi Neurologici
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6213249/TMAO
marcatore precoce per la
Sindrome Metabolica
Mauro Amato
https://www.researchgate.net/publication/329649472_Trimethylamine-N-oxide_TMAO_as_Novel_Potential_Biomarker_of_Early_Predictors_of_Metabolic_SyndromeDISBIOSI
laboratorio
Dosaggio Immunochimico
IL-1
Citochine TNFα
infiammatorie primarie IL-6 - Citochina secreta da vari tipi cellulari
(macrofagi, monociti, cellule dendritiche,
fibroblasti e cellule endoteliali) spettro di
azione su grande varietà di cellule/tessuti
- Stimola il fegato a produrre le proteine di
- Citochina prodotta da leucociti attivati è fase acuta
implicata nella regolazione della risposta
immunitaria Citochina coinvolta nella risposta
- Marcatore di attivazione del sistema infiammatoria e nell’induzione di
immunitario apoptosi.
- Stimola inoltre la produzione
delle proteine della fase acuta
Citochina
Recettore cellulare
Mauro Mario Amato
Risposta infiammatoria All Rights ReservedDisbiosi e produzione anormale
di citochine infiammatorie
Resistenza Anticamera per il diabete
- Insulina
Insulinica immunochimica
- Curva Insulinemica da carico orale di glucosio
- Indice HOMA-IR
equazioni matematiche
- Indice QUICKI e OGIS
Lipopolisaccaridi Componenti della parete esterna dei gram- (Lipide A
enterobatteri ) attivanti l’infiammazione
Endotossine
- Test pirogeno del coniglio (test in vivo)
- Test
Maurodel Limulus (capacità del lisato di amebociti dell’emolinfa di gelificare in presenza di piccolissime quantità di endotossina
Amato
- Test cromogenico (lisato modificato di Limulus e substrato cromogeno )
- ELISA test (immunoenzimatizo basato sul dosaggio delle LPS) https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5131922/Interazione Microbiota-Immunità in
caso di cancro
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6387318/Correlazione
Microbiota/Infiammazione/NAFLD
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5797576/Correlazione
Microbiota/Infiammazione Intestinale
in relazione a Dieta/Stress estrinseco
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6722800/DISBIOSI
Resistenza Insulinica
- Clamp Euglicemico-iperinsulinemico
(Test gold-standard abbastanza invasivo)
- Curva Insulinemica da carico orale di glucosio
Funzioni matematiche
HOMA-IR (Homeostasis Model Assessment – Insulin Resistance)
HOMA-β (Homeostasis Model Assessment – β cell function)
Indice QUICKI (Quantitative Insulin sensitivity Check Index)
InsuTAG
TyG Index (Indice Trigliceridi-Glucosio)
Trigliceridi/HDL Ratio (Rapporto Trigliceridi-HDL-Colesterolo a digiuno)
Mauro Mario Amato
All Rights ReservedRuolo microbioma
Obesità e Resistenza insulinica
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31087391- Componenti parete batteri gram- (enterobatteri)
Lipopolisaccaridi (LPS) - Endotossine o Lipoglicani
- Antigene O (somatico) Core Lipide A
Laboratorio
Limulus Test Limulus Amoebocyte Lysate (LAL)
Test Cromogenico
Test Immunoturbidimetrico
Immunochimico (ELISA LPS specifico)
Est.
Presenza nel lisato di amebociti di Limulus
Poliphemus di un proenzima che attivato da LPS
determina la gelificazione del lisato stesso
oligosacaride Int.
Basato sulla reazione anticorpo (anti-LPS
adesi microtiter) e antigene (LPS presenti
nel campione) con sviluppo di colore di
intensità proporzionale alla quantità di LPS
Basato sulla reazione anticorpo (anti-LPS presente
in ambiente di reazione) e antigene (LPS presenti
nel campione) con sviluppo e misura della torbidità Responsabile
proporzionale alla quantità di LPS della gran parte
della tossicità
Sviluppo colore in seguito all’attivazione del batterica
proenzima Factor C da parte del LAL.
Intensità del colore proporzionale alla
quantità di LPS presenti nei liquidi biologici. Disbiosi
Test aspecifico
Mauro Mario Amato
All Rights ReservedMetodi per determinazione
Lipopolisaccaridi
https://www.intechopen.com/books/-i-escherichia-coli-i-recent-advances-
on-physiology-pathogenesis-and-biotechnological-applications/detection-
methods-for-lipopolysaccharides-past-and-present
Mauro AmatoLipopolisaccaridi (LPS) Componenti della parete esterna dei gram- (Lipide A enterobatteri ) attivanti l’infiammazione
Endotossine
Acidi grassi a catena corta - Test pirogenoAcetato
del coniglio
(circa 50%)
fecali (fecal SCFA) - Test
90-95% del Limulus (capacità
Propionato del lisato
(circa Gas-cromatografia
20%) di amebociti dell’emolinfa di gelificare in presenza
(fermentazione delle fibre) di piccolissime quantità(circa
Butirrato di endotossina
20%)
- Test cromogenico (lisato modificato di Limulus e substrato cromogeno )
- ELISA test (immunoenzimatizo basato sul dosaggio delle LPS)
- La TMAO è un sottoprodotto dei batteri intestinali durante la (HPLC-MS)
digestione di componenti delle carni rosse, uova e derivati del latte. High-Performance Liquid
Chromatography
TMAO - L’aumento di concentrazione legata non solo alle CVD ma anche alla MetS.
Mass Spectrometry
(trimetilannina ossido) - Evidenziato dosaggio triplicato nei i soggetti con dieta ricca di carne
rossa rispetto alla dieta ricca di carni bianche o proteine per vegetali.
urine
IL-1 Correlazione diretta
Citochine TNF spettro di azione su grande varietà di cellule/tessuti LPS/Leaky Gut
Immunochimica
infiammatorie primarie IL-6 molecola responsabile della produzione di proteine di fase acuta
Resistenza Anticamera per il diabete
- Insulina
Insulinica immunochimica
- Curva Insulinemica da carico orale di glucosio
- Indice HOMA-IR
equazioni matematiche
- Indice QUICKI e OGIS
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3562736/Associazione diretta Associazione inversa
LPS/Fibrillazione atriale Dieta mediterranea/LPS
Mauro Amato
https://www.ahajournals.org/doi/full/10.1161/JAHA.117.005784Ribosoma batterico
70S Identificazione MICROBIOTA
16S rRNA gene sequencing
Subunità
50S
Studio Gene codificante 16S rRNA
informazioni tassonomiche
Subunità
30S
- Geni 16S rRNA sono un misto di zone
ipervariabili e zone conservate
- Studiando zone diverse dello stesso gene si ottengono
informazioni a diverso livello tassonomico
Amplificazione PCR
Geni molto Zone geniche Regioni Zone random
conservati ipervariabili spaziatrici nel genoma
Genere Specie Sottospecie Ceppo
Mauro Mario Amato
All Rights ReservedIdentificazione MICROBIOTA
16S rRNA gene sequencing
Gene 16S rRNA
Campione feci Estrazione del DNA
Amplificazione PCR
DNA Data Bank
Sequenziamento DNA
Purificazione
16S rRNA Separazione DNA
elettroforesi su gel di agarosio
Identificazione
Fotografia istantanea legata al
solo momento del prelievo fecale
Mauro Mario Amato
All Rights ReservedComposizione Microbiota
in funzione della dieta, età,
ambiente e malattie
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30634578
Mauro AmatoMauro Amato
MICROBIOTA Intestinale 90%
Gram+
Gram+
Mauro
AmatoMICROBIOTA Intestinale 10%
Gram+
Gram-
Gram-
Mauro AmatoNature Microbiology
Biogeografia
microbiota intestinale
https://www.researchgate.net/publication/283264463_Gut_biogeography_of_the_bacterial_microbiota
Mauro AmatoMICROBIOTA Intestinale
Le famiglie batteriche
riflettono differenze
fisiologiche lungo
l'intestino in funzione
della carica batterica,
del pH, delle sostanze
antimicrobiche (compresi
i secreti biliari) e del
tenore di O2
www.nature.com/micro
Mauro AmatoFirmicuti/Bacteroiditi
e target glicemico
ottimale dell’ospite
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6363653/
Mauro AmatoSono numerose le malattie/sindromi in qualche modo collegate alla Disbiosi intestinale
Le più studiate:
Gastrointestinali: MICI, IBS, Cancro colon-retto, Infezione da Clostridium difficile
Malattie croniche: Morbo di Alzheimer e di Parkinson, Disordini Spettro Autistico,
Sindrome da stanchezza cronica
Malattie autoimmuni: Artrite reumatoide, Sclerosi multipla, DMT1
Metabolismo: Obesità, Sindrome metabolica, DMT2
Mauro Mario Amato
All Rights ReservedMauro Amato
Ruolo microbiota nella
patogenesi MICI
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29285689Diversità Microbiota
durante gli stadi
attivi/inattivi del CD e UC
Mauro Amato
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmed.2018.00304/fullFrontiers in Microbiology
August 2018 | Volume 9 | Article 1835
The Human Gut Microbiome
A Potential Controller of Wellness and Disease
Tipo di Disbiosi/Specificità di malattia
Mauro AmatoSpecificità di Malattia/Microbiota implicato Mauro Amato https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2018.01510/full
DISBIOSI e IBD/MICI (Malattie Infiammatorie Croniche Intestinali)
Alterazione
Microbiota Lume Fattori
Ambientali
Stress psicologico Dieta e stato sociale
laboratorio Fumo di sigaretta
Difetti epiteliali con Farmaci
(Crohn)
lesione delle giunzioni
Contraccezione orale
Appendicectomia
Anomala sensibiliz. metaboliti citochine
Mucosa Alterazione Immunità
delle APC
Microbiota MICI compromessa
Leaky Gut
Anomala presentazione
degli antigeni
citochine
Predisposizione
Genetica
Reattività sbilanciata
cellule immunocompetenti Si associano:
- Emocromocitometrico, sideremia, ferritina
- Ricerca sangue occulto e leucociti fecali
- Test di permeabilità intestinale (Zonulina)
- Determinazione Tossina A/B Clostridium diff.
Test di I livello - α1-Antitripsina
- VES, PCR e ß2-Microglobulina - Viro-immunologia: HBV, HCV, HIV, EBV, CMV
- Calprotectina e Lactoferrina fecale - Coprocoltura e parassitologico feci
- Anticorpi anti-citoplasma dei neutrofili (ANCA) - Zinco e Magnesio
Mauro Mario Amato
- Vit. B12, Acido Folico
- Anticorpi anti-Saccharomyces Cerevisiae (ASCA) All Rights ReservedEUBIOSI
DISBIOSI
PERMEABILITA’
INTESTINALE
Mauro Mario Amato
All Rights ReservedDISBIOSI TEST DI PERMEABILITA’ INTESTINALE
(Rapporto Lattulosio/Mannitolo)
Lattulosio Mannitolo Lattulosio
- Test diretto più comune per una Leaky Gut:
Utilizza il Lattulosio come grossa molecola e il
Mannitolo come piccola.
Normalmente il Lattulosio viene assorbito soltanto
per l’1% mentre il Mannitolo per circa il 14%
- Essendo zuccheri non metabolizzabili si
ritroveranno escreti nelle urine.
- Dopo aver fatto osservare alcune precauzioni, al
paziente vengono somministrati 5 gr. di Lattulosio
Flusso ematico e 1 gr. di Mannitolo.
- Dopo 6 ore si dosano, in un campione di urine dello
stesso paziente, questi due composti.
Il rapporto Lattulosio/Mannitolo deve essere
inferiore a 0.03 (in un intestino sano passeranno
nel flusso ematico e saranno escrete solo le
molecole più piccole di mannitolo).
- La presenza di molecole di Lattulosio (più grandi)
nelle urine è indicativa di Aumentata
Mauro Mario Amato Permeabilità Intestinale
All Rights ReservedPERMEABILITA’ INTESTINALE
Tight Junction e Zonulina Mauro Mario Amato
Disbiosi All Rights Reserved
< 38.0 ng/ml dosaggio
siero/plasma immunochimico
14-108 ng/ml
feci Perdita di aderenza
intercellulare
Lume intestinale Zonulina Enterocita
danneggiato
Tight Junction (TJ)
(giunzioni strette)
Adherens Junction (AJ)
(giunzioni aderenti)
Membrana basale Passaggio paracellulare Passaggio transcellulare
Junctional Adhesion Molecules (JAM)
(molecole di adesione giunzionale)
Claudine Reazioni immunitarie
- Prodotta dalle cellule enteriche (correlata
all’Aptoglobina) Occludine Actina Miosina
- Modula la permeabilità delle tight junction Zonulina Recettore Zonulina
- Considerato “ormone” regolatore della (pre-Aptoglobina 2)
(pre-HP2) MLCK
permeabilità intestinale (Miosine Light Chain Kinase)DIALOGO INTESTINO-CERVELLO E LEAKY GUT
Conseguenze neuropsichiatriche
correlate all’aumentata permeabilità intestinale
Frontiers in Cellular Neuroscience 10.3389/fncel.2015.00392
Mauro AmatoBiomarcatori di Leaky Gut
- Zonulina sierica/fecale
In condizioni normali
non è rilevabile
- I-FABP (Intestinal Fatty Acid Binding Protein) plasma/urine
- IL-6 (Interleuchina 6) plasma/siero Immunochimica/ELISA
Immunochimica/Elettrochemiluminescenza ultra-sensibile fino a 1.8 pg/mL
Mauro Mario Amato
All Rights ReservedCoinvolgimento della zonulina
nelle MICI
https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/21688370.2016.1251384
Mauro AmatoAptoglobila/Zonulina
Ruolo nelle MICI
https://www.tandfonline.com/doi/pdf/10.4161/tisb.27321?needAccess=true Mauro AmatoAssociazione diretta
tra Zonulina serica e
Iperlididemia/Obesità
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5372598/LPS e Zonulina quali Associazione diretta
Biomarcatori di proinfiammazione DMT2 LPS e Zonulina serica e Infiammazione/DMT2
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24347174
Mauro AmatoAssociazione diretta
Zonulina serica/PCOS
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25336505
Mauro AmatoAssociazione
Aumentata Permeabilità intestinale
Depressione e Comportamento suicidario
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6587489/ Mauro AmatoSINDROME DELL’INTESTINO IRRITABILE (IBS) – Criteri diagnostici Consensus Roma IV
Forma delle feci scala Bristol (Lewis e Heaton, 1997, mod.)
Il 25% è la soglia
Dure/Grumose % per la classificazione
Diarrea sciolta/acquosa % Mauro Mario Amato
All Rights ReservedSINDROME DELL’INTESTINO IRRITABILE (IBS)
Laboratorio
Indagini di laboratorio:
Mauro Mario Amato
- VES, PCR e ß2-Microglobulina All Rights Reserved
- Calprotectina/Lattoferrina fecale
- Sideremia e Ferritina
- FOB ed Esame urine
- Anti-Transglutaminasi tissutale IgA e IgA totali
Indagini di seconda istanza:
- Studio Ormonale (steroidi sessuali e corticosteroidi,
tiroidei, gastrina, somatostatina, motilina, serotonina)
- OCT (velocità di transito oro-cecale)
- Zonulina
- Anti-CdtB (Cytolethal Distending toxin B) Test di 2^ generazione che
- Anti-Vinculina differenziano IBS-D dalle MICI
CDT (proteina batterica) induce rotture del doppio Vinculina proteina per l’ancoraggio filamenti
filamento del DNA con morte cellulare o mutagenesi actina/citoscheletro alla membrana cellulare.Anti-CdtB/Anti-vinculina elevati
in IBS rispetto ai IBD
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31152332Zonulina sierica alta in
IBS/Celiachia
Correlazione diretta
Zonulina/IBS-D
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6545708/
Mauro AmatoIn presenza di sintomi principali: Dolore addominale – Diarrea – Febbre – Perdita di peso
Esclusione Dosaggio Esclusione
Celiachia Calprotectina fecale Gastroenteriti infettive
- Anti-tTG - Sangue occulto e leucociti fecali
- IgA totali - Tossina A/B Clostridium difficile
- Anti-DGP - Viro-immunologia: HBV, HCV, HIV,
- Anti-EMA < 50 µg/g 50-200 µg/g > 200 µg/g EBV, CMV
- Indagine genetica - Coprocoltura e parassitologico feci
HLA DQ2-DQ8
IBS Bassa attività infiammatoria Alta attività infiammatoria
Disordine funzionale MICI in remissione MICI stadio attivo
Ulteriori indagini per Ulteriori indagini Differenziazione CD/UC
IBS (imaging, biopsia) (sierologia per ASCA/ANCA)
Tratto da ORGENTEC Diagnostika
Mauro Mario Amato
All Rights ReservedCALPROTECTINA FECALE
Mauro Mario Amato
All Rights Reserved - Proteina antimicrobica (legante il
calcio) essenzialmente presente
nei neutrofili.
Neutrofili
La sua presenza nelle feci è
utilizzata come indice di
infiltrazione di neutrofili nel
Neutrofili lume intestinale.
Calprotectina Test per la determinazione della
calprotectina fecale (marker di
flogosi intestinale).
Verifica, in modo non invasivo
CALPREST
la presenza di uno stato
infiammatorio intestinale.
Calprotectina fecale -La calprotectina fecale aumenta
in oltre il 95% dei pazienti con
MICI.
- Il Calprest può differenziare (in modo affidabile)
i soggetti con MICI da quelli con IBS
- Il Calprest negativo esclude (con quasi certezza) Dosaggio immunochimico
una infiammazione della mucosa intestinale
- Usato anche in casi pediatrici Valori riferimento
border-line 35-50 ug/g feciLATTOFERRINA FECALE
- Detta anche Lattotransferrina è
proteina legante il ferro presente
come “scorta” nei granuli dei
neutrofili.
neutrofili -La sua presenza nelle feci è
utilizzata come indice di
infiltrazione di neutrofili nel lume
neutrofili intestinale (marker di flogosi intestnale)
Lattoferrina
-Come la calprotectina verifica, in
modo non invasivo la presenza di
uno stato infiammatorio
intestinale.
-La lattoferrina e calprotectina
Lattoferrina fecale fecale aumentano nel 95-98%
dei pazienti con MICI
Dosaggio utile al monitoraggio
dello status di malattia
- Il Calprest e Lattoferrina negativi escludono
Dosaggio
(con quasi totale certezza) una infiammazione immunochimico
della mucosa intestinale
- Usato anche in casi pediatrici Assente in Mauro Mario Amato
condizioni normali All Rights Reserved
Mauro AmatoCALPROTECTINA e LATTOFERRINA
Immunocromatografia a flusso laterale (dispositivo CARD) Mauro Mario Amato
All Rights Reserved
zona zona
coniugato test/controllo
Test Positivo: due bande colorate in rosso
Test Negativo: una sola banda rossa zona zona
campione letturaCALPROTECTINA e LATTOFERRINA
Immunocromatografia
MICI a flusso laterale (dispositivo CARD)
Neutrofili
Neutrofili
Lattoferrina
Lattoferrina fecale
Verde Controllo
Rosso Calprotectina
Azzurro Lattoferrina
Mauro AmatoRuolo microbioma
patogenesi IBS
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6039952/
Mauro AmatoDisbiosi SIBO (Small Intestinal Bacterial Overgrowth)
Sovracrescita Batterica del Tenue
Mauro Mario Amato
All Rights Reserved
Normalmente il tenue possiede una minima
concentrazione di flora microbica non in
grado di fermentare i carboidrati.
La SIBO è invece caratterizzata dalla
presenza nel tenue di batteri carboidrati-
fermentanti causa di disturbi intestinali.
Test Gold-Standard
Aspirato/coltura dell'intestino tenue
Significatività clinica con crescita di 103-105 ufc/ml
Test invasivoSIBO
Sovracrescita Batterica del Tenue - Sintomatologia
Mauro Mario Amato
All Rights ReservedSIBO (Small Intestinal Bacterial Overgrowth)
H2-GLUCOSIO BREATH TEST
Indagine di laboratorio per la determinazione
della SIBO
Il protocollo standard prevede:
- Informativa al circa l’esecuzione del test
- Misurazione concentrazione di H2
nell’espirato (T0)
- Somministrazione di 50 g di Glucosio
solubilizzati in 200 ml di acqua dopo un
digiuno di almeno 10 ore
- Misurazione della concentrazione di H2
nell’espirato ai tempi T20, T40, T60, T80,
T100, T120
- Elaborazione dei dati
Condizioni Normali
Il glucosio viene completamente
assorbito a livello del digiuno e
quindi non si rileva un aumento
della concentrazione di H2 Mauro Mario Amato
All Rights ReservedNORME DI PREPARAZIONE
H2-Breath test (Lattosio, Lattulosio, Glucosio, Fruttosio)
Informativa al paziente
5-7 giorni precedente il test
Farmaci da evitare:
Alimenti da evitare:
- Antibiotici, lassativi, antiacidi e inibitori di pompa
- Fermenti lattici e yogurt
(almeno 15-20 gg)
- Latte e derivati (latte animale)
- Farmaci non essenziali (da 12h prima del test)
- Preparati contenenti latte
- Salumi e affettati contenenti lattosio
Il paziente non deve avere in corso
Alimenti consentiti: diarrea significativa
- Prodotti a base di soia
- Latte di mandorla Dalle ore 21.00 del giorno precedente digiuno
- Riso e suoi preparati completo senza fumare (può bere liberamente
acqua non gassata).
Digiuno di circa 10-12 ore
DIETA DEL GIORNO PRIMA DEL TEST
La mattina dell’esame:
Colazione: libera (evitando gli alimenti
- Lavaggio accurato dei denti
di cui sopra)
- Pulizia cavo orale (con colluttorio se necessario)
Pranzo: piatto di riso bollito con poco - Non svolgere attività fisica e non fumare
olio (entro le 14.30)
Cena: carne o pesce e insalata con
poco olio e sale (no limone)
Astenersi da pasti intermedi
Mauro Mario Amato
All Rights ReservedSIBO (Small Intestinal Bacterial Overgrowth)
H2-GLUCOSIO BREATH TEST
Mauro Amato
All Rights Reserved
DOB
(Delta Over Base)
> 12 ppm rispetto
al T0
Condizioni
Normali
H2 ppm significative
già a 60 min
Condizione di SIBO
Il glucosio fermentato nel tenue
(digiuno) e questo comporta un
aumento della concentrazione
di H2 nell’espirato con valori di
ppm già significativi a 60 minSIBO
H2-GLUCOSIO Breath test vs H2-LATTULOSIO Breath test
Accuratezza diagnostica stimata 72% Accuratezza diagnostica stimata 54%
Meno probabilità di falsi positivi Più probabilità di falsi positivi
(glucosio ben assorbito e poco probabile che raggiunga il colon) (lattulosio non assorbito e può raggiungere il colon)
SIBO ileale spesso non evidenziabile SIBO ileale spesso evidenziabile
(in genere glucosio tutto assorbito prima) (lattulosio non assorbito e raggiunge l’ileo)
Non idoneo per soggetti diabetici Idoneo per soggetti diabetici
Non idoneo per soggetti non-H2 producer Non idoneo per soggetti con
(associazione con la misurazione del CH4) tempo di transito intestinale aumentato
Risultati associati all’età e sesso
Non idoneo per non-H2 producer
(misurazione CH4)
Mauro Mario Amato
All Rights ReservedSENSIBILITÀ= probabilità che un malato risulti positivo
SPECIFICITÀ= probabilità che un sano risulti negativo
Update on diagnostic value of breath test in gastrointestinal and liver diseases
World J Gastrointest Pathophysiol. 2016 Aug 15; 7(3): 256–265SIBO Lattulosio-BT
donne: aumento probabilità positivi con l’età
uomini: diminuzione positivi con l’età
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4814632/Mauro Amato
Stato dell’arte sulla
SIBO pediatrica
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fped.2019.00363/fullSIBO Revisione sistematica con meta-analisi
Mauro Amato
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6955189/SIBO Gestione Clinica e Terapeutica
Mauro Amato
https://journals.lww.com/ctg/fulltext/2019/10000/small_intestinal_bacterial_overgrowth__clinical.2.aspxSIBO Mauro Amato
Mauro Amato
All Rights Reserved
probabile SIBO
Quantità di H2 ppm
significativa a 40 min.DIABETICO con IBS
SIBO
(picco a 113 min)
OCT= 210 min
Quantità di H2 ppm
significativa a 75 min.SIBO
Mauro Amato
All Rights Reserved
probabile SIBODISBIOSI INFEZIONE DA CLOSTRIDIUM DIFFICILE
Tossine A e B
Infectious Diseases and Therapy March 2017, Volume 6DISBIOSI INFEZIONE DA CLOSTRIDIUM DIFFICILE (Diagnosi di Laboratorio)
- Determinazione Tossina A (Immunochimica/Immunocromatografia)
Linee guida
ISDA
- Determinazione Tossina B (Immunochimica/Immunocromatografia)
- Determinazione C.difficile GDH
Campione feci (Immunochimica/Immunocromatografia)
C. difficile utilizza durante la sua crescita grande quantità di acido glutammico
Citotossina principale responsabile delle lesioni della mucosa intestinale
Enterotossina causa di diarrea e lesioni della mucosa
Spore germinative Crescita vegetativa C. difficile
Microbiota in EUBIOSI sali biliari secondari inibizioneGrazie per la
vostra attenzione
lab.amato@virgilio.it
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