RDT DENGUE IGA/IGG 25 - BIO-RAD

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Salute e fitness

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RDT Dengue IgA/IgG
25 70701
Test rapido per la rilevazione simultanea di anticorpi IgA e IgG diretti contro il virus della
dengue nel siero, plasma o sangue intero venoso umano.

881105 – 2015/11

1. USO PREVISTO
Il test di diagnosi rapida IgA/IgG dengue è un test individuale di rilevazione qualitativa e differenziale di anticorpi IgA/IgG diretti
contro l'antigene NS1 del virus della dengue nel siero, plasma o sangue intero venoso umano, utile nella diagnosi dell'infezione
acuta da dengue.

2. RIEPILOGO E ILLUSTRAZIONE DEL TEST
Nelle regioni tropicali e subtropicali la dengue è la più importante arbovirosi in termini di morbilità e mortalità. L'infezione da
virus della dengue può presentare diversi quadri clinici, che vanno dall'infezione asintomatica alla febbre indifferenziata leggera
o la classica febbre da dengue (DF), la febbre emorragica da dengue (DHF) o persino la sindrome da shock da dengue con
potenziale esito fatale.
Una diagnosi efficiente e precisa della dengue è di importanza essenziale sotto il profilo dell'assistenza clinica, con il
rilevamento precoce dei casi più gravi, la conferma di tali casi e la diagnosi differenziale con altre malattie infettive. Durante le
prime fasi delle malattia è possibile ricorrere all'isolamento del virus, alla rivelazione dell'acido nucleico o dell'antigene NS1 per
diagnosticare l'infezione. Al termine della fase acuta dell'infezione il metodo di elezione per la diagnosi è quello sierologico (1,
2).
Gli anticorpi IgA della dengue sono rilevabili dopo 3-6 giorni dall'insorgere della malattia (3), periodo in cui i virus della dengue in
circolazione e l'antigene NS1 scompaiono dal sangue. Si raccomanda di utilizzare il test di diagnosi rapida IgA/IgG unitamente
ai dosaggi di rilevazione dell'antigene NS1 della dengue per garantire una diagnosi accurata del paziente in tutto il range della
fase acuta della patologia. Recentemente, l'IgA specifica della dengue è stata descritta come un marcatore efficiente soprattutto
nelle infezioni secondarie (4, 5) o in caso di infezioni primarie che conducono a esiti gravi (6). La rilevazione dell'IgG della
dengue fornisce informazioni complementari che, in funzione del tempo di campionatura successivo all'insorgere della febbre,
può contribuire all'orientamento della diagnosi rispetto alle infezioni con rischio maggiore di complicanze (6).

3. PRINCIPIO DELLA PROCEDURA
Il test di diagnosi rapida IgA/IgG dengue è un test unitario monouso basato sul principio della immuno-cromatografia a flusso
laterale su una strip strip in una cassetta.
Si distribuiscono 5 µl del campione da testare (siero o sangue intero venoso) nel pozzetto del campione identificato. Si
aggiungono quindi 3 gocce di tampone di migrazione al pozzetto del tampone, sia campione sia coniugato migrano lungo la
strip della membrana. I risultati sono disponibili dopo 20 minuti di migrazione.
Se presenti nel campione, gli anticorpi IgA e/o IgG specifici per la dengue formeranno un complesso con l'immunoglobulina di
cattura corrispondente sulla linea di test sulla strip e con l’antigene associato agli anticorpi anti-NS1 rivestiti di particelle di oro
colloidale. Apparirà quindi una linea color porpora. Qualunque sia lo stato del paziente, la linea colorata deve passare
dall'azzurro al porpora altrimenti il test non è considerato valido e dovrà essere ripetuto utilizzando un campione fresco e una
nuova cassetta.
Per la procedura dettagliata e l'interpretazione dei risultati, fare riferimento allo schema riportato alla fine dell'inserto.

4. REAGENTI

4.1 Descrizione

Etichetta Natura dei reagenti Presentazione

Cassetta Dispositivo per il test confezionato singolarmente in alluminio con materiale 25 x 1
assorbente. Pronto uso
La strip del test comprende un tampone campione, un tampone di
coniugato costituito da oro colloidale rivestito di anticorpi e Ag della dengue
e una membrana di celluloide rivestita di anticorpi anti-IgG umane (linea di
test IgG), anticorpi anti-IgA umane (linea di test IgA) e anticorpi IgG anti-
murini (linea di controllo).
Tampone di Tampone di borato 1 x 3 ml
migrazione Conservante: ProClin™ 300 Pronto uso

4.2. Requisiti di conservazione e trattamento
Il test di diagnosi rapida IgA/IgG dengue deve essere conservato a 2-30°C in un luogo asciutto. È possibile utilizzare i reagenti
fino alla data di scadenza indicata sulla confezione.

Identificazione Conservazione
Cassetta In confezioni singole sigillate, fino alla data di scadenza a 2-30°C.
Tampone di migrazione Prima dell'apertura, a 2-30°C fino alla data di scadenza, dopo l'apertura 2 mesi a 2-30°C

5. AVVERTENZE E PRECAUZIONI
Esclusivamente per uso diagnostico in vitro. Esclusivamente per uso professionale.

5.1 Salute e sicurezza
 Questo kit deve essere maneggiato esclusivamente da personale adeguatamente addestrato e qualificato nelle procedure
di laboratorio e cosciente dei potenziali rischi connessi. Indossare abbigliamento protettivo, guanti e protezioni per
occhi/viso adeguati e manipolare gli oggetti in maniera appropriata nel rispetto della buona pratica di laboratorio.
 Manipolare i campioni dei pazienti e qualsiasi materiale a diretto contatto con gli stessi come potenzialmente in grado di
trasmettere malattie infettive.
 Evitare la fuoriuscita dei campioni. I versamenti devono essere sciacquati con candeggina diluita al 10 %. Il materiale
utilizzato per la pulizia deve essere smaltito in un contenitore per residui contaminati.
 I campioni dei pazienti e il materiale contaminato dovranno essere smaltiti previa decontaminazione.
 Per le raccomandazioni su precauzioni e rischi correlati ad alcuni componenti chimici del presente kit, consultare i simboli
riportati sulle etichette e le informazioni fornite alla fine delle istruzioni per l'uso. La scheda di sicurezza è disponibile
all'indirizzo www.bio-rad.com.

5.2 Precauzioni relative alla procedura
 Esclusivamente monouso.
 Non utilizzare alcuna parte del test oltre la data di scadenza.
 Attenersi sempre alle condizioni di conservazione raccomandate.
 Non aprire la confezione fino all'esecuzione del dosaggio.
 Non toccare la zona di reazione con le dita.
 Seguire attentamente la procedura di dosaggio.
 NON RISCALDARE IL CAMPIONE.
 Per distribuire il campione nel relativo pozzetto, tenere la pipetta in posizione verticale (”S”).
 Il test deve essere effettuato a una temperatura compresa tra 18°C e 37°C.
 Se la conservazione avviene in frigorifero, prima dell'uso attendere almeno 30 minuti per consentire ai reagenti di
stabilizzarsi a temperatura ambiente.
 Non mescolare reagenti appartenenti a numeri di lotto di kit differenti.
 Non utilizzare il dispositivo di test se la confezione è danneggiata.
 Non utilizzare il dispositivo di test se la confezione è priva di materiale assorbente.
 Non eseguire il test in presenza di ventilazione diretta che potrebbe asciugare la strip.

6. CAMPIONI
Il tipo di campione raccomandato è siero, plasma (EDTA, eparina o citrato) o sangue intero sull'anticoagulante (EDTA, eparina
o citrato).
Per la manipolazione, l’analisi e la conservazione dei campioni ematici, attenersi alle seguenti raccomandazioni:
 Prelevare tutti i campioni di sangue secondo le precauzioni in uso in materia di prelievo venoso.
 I campioni di sangue intero dovranno essere conservati a 2-4°C e testati entro 7 giorni. Non congelare i campioni di sangue
intero.
 Per il siero, consentire la coagulazione dei campioni.
 Assicurarsi che le provette siano sempre chiuse.
 Dopo la centrifugazione, separare il siero dal coagulo o dai globuli rossi e conservarlo in una provetta chiusa
ermeticamente.
 I campioni di siero possono essere conservati a +2-8° C se il test viene eseguito entro 7 giorni In caso contrario, oppure in
caso di spedizione, congelare i campioni a una temperatura di -20° C o inferiore.
 Non congelare/scongelare i campioni di siero più di 3 volte. I campioni precedentemente congelati devono essere
accuratamente miscelati (vortex) dopo lo scongelamento e prima del test.
 Non riscaldare i campioni.

7. PROCEDURA

7.1 Materiale necessario

7.1.1 Materiali forniti
Ogni kit RDT Dengue IgA/IgG contiene:
 Venticinque (25) cassette confezionate singolarmente in alluminio con materiale assorbente per test individuali.
 Un (1) contagocce del tampone di migrazione (3 ml).
 Un (1) opuscolo di istruzioni.

7.1.2 Materiali necessari ma non forniti
 Pipette o multipipette automatiche o semi-automatiche, regolabili o preimpostate per misurare e dispensare 5 µl.
 Puntali monouso.
 Guanti monouso.
 Occhiali di sicurezza .
 Ipocloruro di sodio (candeggina) e bicarbonato di sodio.
 Contenitore per rifiuti biologici potenzialmente pericolosi.

7.2 Preparazione di reagenti
Tutti gli altri reagenti sono pronti per l'uso.

7.3 Procedura di analisi
Fare riferimento alla figura alla fine del documento.
 Rimuovere la cassetta dalla confezione e posizionarla su una superficie piana.
 Applicare sul dispositivo un ID paziente o il numero di identificazione.
 Utilizzare una pipetta di laboratorio per distribuire 5 µl di campione nel relativo pozzetto (“S”) della cassetta tenendo la
pipetta in posizione verticale.
 Con il flacone del contagocce del tampone di migrazione, aggiungere immediatamente 3 gocce di tampone di migrazione
nel pozzetto del diluente rotondo della cassetta.
 Leggere i risultati dopo 20 - 30 minuti di migrazione a temperatura ambiente (18-37°C).
 Non leggere i risultati prima dei 20 minuti di migrazione

7.4 Interpretazione dei risultati
Considerare reattive tutte le bande, anche se non chiaramente identificabili.
 RISULTATO REATTIVO: banda porpora presente sulla linea di test A (IgA) e/o G (IgG) e sulla linea di controllo (C).
 RISULTATO NON REATTIVO: banda porpora presente solo sulla linea di controllo (C).

NEGATIVO Nessuna rilevazione di IgA o IgG; in caso di sospetta
Presenza della banda di controllo C e assenza dengue, ripetere il test dopo 3-5 giorni.
delle bande G e A
POSITIVO Presenza di IgA contro il virus della dengue. Indicativo di
IgA: Presenza della banda di controllo C e infezione acuta da dengue primaria o secondaria.
della banda A e assenza della banda G

IgG: Presenza della banda di controllo C e Presenza di IgG contro il virus della dengue. Indicativo di
della banda G e assenza della banda A infezione da dengue in corso o pregressa.
IgA e IgG: Presenza di bande A e G e banda Presenza di IgA e IgG contro il virus della dengue.
di controllo C porpora Indicativo di infezione da dengue primaria o secondaria.

NON VALIDO La causa più frequente di un risultato non valido è una
Assenza di banda di controllo C porpora. procedura errata. Ripetere il test su un campione fresco
con una cassetta nuova.

7.5 Criteri di validazione del test
Se la linea di controllo (C) è assente, il test è ritenuto NON VALIDO e dovrà essere ripetuto con una cassetta nuova.

8. Limitazioni del TEST
Un'infezione recente da virus delle dengue potrà essere diagnostica soltanto in base a una combinazione di dati clinici e
biologici.
    Il risultato negativo del test non può escludere un'infezione recente.
    Sono state riportate reazioni sierologiche crociate con altri Flavivirus (encefalite giapponese, West Nile virus e della febbre
     gialla).
    Il test RDT Dengue IgA/IgG è un test qualitativo e non indica la quantità di anticorpi IgA o IgG nel campione.
    Gli anticorpi IgG e IgA possono persistere dopo la fase di convalescenza.
    Interpretare i risultati solo dopo 20 minuti di migrazione.

9. CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI

9.1. Prestazioni cliniche

9.1.1 Specificità relativa
La specificità relativa è stata valutata su campioni di siero o sangue venoso intero di donatori di sangue o sieri di pazienti febbrili
con diagnosi clinica negativa di infezione da virus Dengue. Il calcolo è stato effettuato utilizzando lo stato clinico come
riferimento.
                                                             IgA                                              IgG
   Popolazione          Totale        Negativo Positivo specificità          95% CI      Negativo Positivo specificità        95% CI
Donatori di sangue
                          115           115        0        100,0%         96,8%-100%         115    0        100,0%       96,8%-100%
    francesi
  Donatori sani
                          50            48         2*        96,0%         86,3%-99,5%        41     9            82,0%    68,5%-91,4%
     indiani
  Pazienti della
                          49            44        5**        89,8%         77,7%-96,6%        40     9            81,6%    68,0%-91,2%
Guiana con febbre
    TOTALE                214           207        7         96,7%         93,4%-98,7%        196    18           91,6%    87,0%-95,0%

*i 2 sieri sono positivi a un test commerciale EIA di cattura IgA
**tra i 5 positivi, 3 sono positivi a un test commerciale EIA di cattura IgA e 1 è positivo a un test commerciale EIA di cattura IgG

9.1.2 Sensibilità relativa
La sensibilità relativa è stata valutata su sieri di pazienti con diagnosi clinica positiva di infezione da virus Dengue. Il calcolo è
stato effettuato utilizzando lo stato clinico come riferimento.

                                                                                                     IgA o NS1*
 Popolazione      N     IgA positivo            95% CI        IgG positivo           95% CI                                 95% CI
                                                                                                       positivo
    India         31       100,0%             88,8%-100%           83,9%        66,3%-94,5%            100,0%             88,8%-100%
  Singapore       50        50,0%             35,5%-64,5%          38,0%        24,6%52,8%                94,0%           83,4%-98,7%
    Guiana
                  133       76,7%             68,5%-83,6%          64,7%        55,9%-72,7%               93,8%           88,1%-97,3%
   francese
     totale       214       73,8%             67,4%79,6%           61,2%        54,3%-67,8%               94,8%           90,8%-97,4%

9.2 Studi di reattività crociata
36 sieri contenenti HAMA (12), ANA (12), o fattore reumatoide (12) sono stati testati con il test RDT Dengue IgA IgG e non
hanno mostrato alcuna reazione specifica.
Una serie di 44 campioni di pazienti con infezioni diverse dalla dengue è stata testata con il test RDT Dengue IgA/IgG.

      Popolazione                N                          IgA negativo                                   IgG negativo
        Malaria                  25                    24                    96%                    24                      96%
     Febbre gialla               11                    11                    100%                   11                     100%
 Virus della febbre del
                                 8                      7                    87,5%                  8                      100%
    Nilo occidentale

9.3 Precisione
La precisione è stata testata con 3 campioni positivi, compresi 2 bassi positivi per IgA, 1 basso positivo per IgG e 1 campione
negativo. L'interpretazione aveva una percentuale di concordanza del 100% con lo stato del paziente, tranne per un punto di
basso positivo con una percentuale di concordanza del 98% e 95% rispettivamente per IgG e IgA.

                                                                                                                                        4

9.4 Studio delle interferenze
I campioni contenenti 0,2g/l di bilirubina non coniugata, campioni emolizzati contenenti 2g/l di emoglobina, campioni lipemici
contenenti l'equivalente di 30 g/l di trioleina (trigliceride) o 5g/L di colesterolo, sieri ricchi di proteine contenenti 120g/l di proteine
totali non compromettono i risultati del test.

10. CONTROLLO DI QUALITÀ DEL PRODUTTORE
Tutti i reagenti prodotti sono preparati secondo il nostro Sistema Qualità, dal ricevimento delle materie prime alla
commercializzazione del prodotto finale. Ogni lotto è soggetto a valutazioni del controllo qualità e viene immesso sul mercato
solo dopo avere accertato la conformità ai criteri di accettazione predefiniti. La documentazione relativa alla produzione e ai
controlli di ogni singolo lotto è conservata presso Bio-Rad.

11. RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI
1. World Health Organization and the Special Programme for Research and Training in Tropical Diseases (TDR) ; Dengue
guidelines for diagnosis, treatment, prevention and control: new edition ; 2009
2. Centers for Disease Control and Prevention ; Dengue Laboratory Guidance and Diagnostic Testing ;
http://www.cdc.gov/dengue/clinicallab/laboratory.html
3. Nawa M., Takasaki T., Ito M., Inoue S., Morita K., Kurane I. 2005. Immunoglobulin A an Antibody Response in Dengue
Patients: a Useful Marker for Serodiagnosis of Dengue Virus Infection. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 12 (10): 1235-1237
4. Jadhav SM, Deoshatwar AR.,2015. A meta-analysis of the diagnostic accuracy of dengue virus-specific IgA antibody-based
tests for detection of dengue infection. Epidemiol Infect. 20:1-11
5. De Decker S, Vray M, Sistek V, Labeau B, Enfissi A, Rousset D., Matheus S. Evaluation of the Diagnostic Accuracy of a
New Dengue IgA Capture Assay (Platelia Dengue IgA Capture, Bio-Rad) for Dengue Infection Detection; 2015; PLoS Negl
Trop Dis 9(3).
6. Rupali B, Kalichamy A, Anand S, Asha S, Paresh S, Dayaraj C; 2015;Higher levels of dengue-virus-speciﬁc IgG and IgA
during pre-defervescence associated with primary dengue hemorrhagic fever. Arch. Virol. 2015; 160;2435-2443.

PROCEDURA DEL TEST
 PREPARAZIONE DEL DISPOSITIVO

                                       • Rimuovere la cassetta dalla confezione e posizionarla su una
                                         superficie piana.

 DISTRIBUZIONE DEL CAMPIONE (5 µl)

                                       • Utilizzare una pipetta da laboratorio per distribuire 5 µl di
                                         campione (siero, plasma o sangue intero venoso) nel relativo
                                         pozzetto (“S”) tenendo la pipetta in posizione verticale.
          i
     EN

 DISTRIBUZIONE DEL TAMPONE DI MIGRAZIONE (3 GOCCE)

                                       • Con il flacone del contagocce del tampone di migrazione,
                                         aggiungere immediatamente 3 gocce di tampone di
                                         migrazione nel pozzetto del diluente rotondo della cassetta.

 FASE DI INCUBAZIONE DELLA MIGRAZIONE (20 – 30 MIN)

                                       • Leggere i risultati dopo 20 - 30 minuti di migrazione a
                                         temperatura ambiente (18-37°C).
                      20 – 30 min.

                                                                                                         6

Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincare
92430 Marnes-la-Coquette - Francia
Tel.: +33 (0) 1 47 95 60 00          2015/11
Fax: +33 (0) 1 47 41 91 33            881105
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                                               8

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