Maxwell CSC DNA FFPE Kit - Promega Corporation

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Maxwell CSC DNA FFPE Kit - Promega Corporation
MANUALE TECNICO

                                                    Maxwell® CSC
                                                    DNA FFPE Kit
                                                    Istruzioni per l’uso del prodotto
                                                    AS1350
                                                    Attenzione: maneggiare le cartucce con attenzione; i bordi del sigillo
                                                    possono essere taglienti.

                                                                                                          ISTRUZIONI PER L’USO
                                                                                                             DEL PRODOTTO

                                                                                                             AS1350
                                                                                                                               6008TA
                                           6006TA

                                                                                                              Revisione 5/18
                        MDSS GmbH                                                                             TM395
2800 Woods Hollow Rd.
                        Schiffgraben 41
 Madison, WI USA        30175 Hannover, Germany
Maxwell CSC DNA FFPE Kit - Promega Corporation
Maxwell® CSC DNA FFPE Kit
                   Tutta la letteratura tecnica è disponibile via Internet all’indirizzo: www.promega.com/protocols/
            Visitare il sito web per verificare che la versione in uso del presente manuale tecnico sia quella più aggiornata.
 In caso di domande sull’utilizzo del prodotto, contattare l’assistenza tecnica Promega all’indirizzo e-mail: techserv@promega.com

 1. Descrizione.................................................................................................................................. 1

 2. Componenti del prodotto, condizioni di conservazione e legenda dei simboli..................................... 2

 3. Uso previsto del prodotto............................................................................................................... 3

 4. Limitazioni all’utilizzo del prodotto................................................................................................ 4

 5. Prima di iniziare........................................................................................................................... 4
    5.A. Preparazione dei campioni FFPE .......................................................................................... 5
    5.B. Preparazione della cartuccia Maxwell® FFPE Cartridge........................................................... 6
 6. Corsa dello strumento................................................................................................................... 7

 7. Post-purificazione......................................................................................................................... 9

 8. Risoluzione dei problemi............................................................................................................. 10

 9. Bibliografia................................................................................................................................. 11

10. Riepilogo delle modifiche............................................................................................................. 11

Maxwell® CSC DNA FFPE Kit è disponibile solo in alcuni paesi. Questo prodotto è conforme ai requisiti essenziali
della Direttiva UE 98/79/EC sui dispositivi medici diagnostici in vitro.

1.     Descrizione
Maxwell® CSC DNA FFPE Kit(a) viene usato in combinazione con Maxwell® CSC Instrument per consentire con
facilità la purificazione efficiente e automatica del DNA genomico (gDNA) da campioni di tessuto umano FFPE
(fissato in formalina e incluso in paraffina) provenienti da mammella, polmone o colon. Maxwell® CSC Instrument
viene fornito con metodi di purificazione preprogrammati ed è progettato per essere utilizzato con le cartucce di
reagenti pre-dosati e con reagenti aggiuntivi forniti nel kit, massimizzando così semplicità e facilità d’uso. Lo
strumento può processare fino a 16 campioni in meno di 60 minuti; il DNA purificato può venire usato
direttamente in analisi a valle basate sull’amplificazione, come PCR.
Maxwell® CSC DNA FFPE Kit purifica l’acido nucleico utilizzando particelle paramagnetiche, che forniscono una
fase solida mobile per ottimizzare la cattura dei campioni, il lavaggio e la purificazione del gDNA. Maxwell® CSC
Instrument è uno strumento che gestisce particelle paramagnetiche. Il sistema consente un legame efficiente del
gDNA alle particelle paramagnetiche nella prima camera di una cartuccia preriempita e sposta il campione
attraverso le camere della cartuccia, mescolando durante l’elaborazione. Questo approccio alla cattura magnetica

Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399 USA · Numero verde per gli USA 800-356-9526 · 608-274-4330 · Fax 608-277-2516    1
www.promega.com                                                                                                             TM395 · Revisione 5/18
Maxwell CSC DNA FFPE Kit - Promega Corporation
evita problemi frequenti quali puntali coagulati o trasferimenti di reagente parziali, che con altri sistemi
    automatizzati comunemente usati portano ad un’elaborazione della purificazione non ottimale.

    2.             Componenti del prodotto, condizioni di conservazione e legenda dei simboli

    PRODOTTO                                                                                          DIMENSIONI                            CAT. N.

    Maxwell® CSC DNA FFPE Kit                                                                             48 prep                          AS1350
    Per uso diagnostico in vitro. Esclusivamente ad uso professionale. Sufficiente per 48 isolamenti
    automatici di campioni FFPE. Le cartucce Maxwell® FFPE Cartridge sono esclusivamente mono-uso.

                                                                                30°C
                                       6008TA

                                                                                                                                  6007TB
                                                                                                                           48

                                                                                       6010TB
                                                              15°C

    Include:
    •     25ml              Mineral Oil
    •     20ml              Lysis Buffer
    • 2 × 1ml               Proteinase K (PK)
    •    100µl              Blue Dye
    •      1ml              RNase A
    •        48             Maxwell® FFPE Cartridges
    •        50             CSC/RSC Plungers
    •        50             Elution Tubes (0.5ml)
    •     25ml              Nuclease-Free Water

    Condizioni di conservazione: Conservare Maxwell® CSC DNA FFPE Kit a 15–30°C.

                  Informazioni sulla sicurezza: Le cartucce di reagenti contengono etanolo e isopropanolo. Queste sostanze
                  devono essere considerate infiammabili, pericolose ed irritanti.
                  Le cartucce Maxwell® FFPE Cartridge sono progettate per essere utilizzate con sostanze potenzialmente
                  infettive. Indossare
                               5295MA.epsdispositivi di protezione individuale (ad esempio, guanti e occhiali) durante la
         6422MA

                  manipolazione di sostanze potenzialmente infettive. Attenersi alle linee guida della propria struttura per la
                  gestione e lo smaltimento di tutte le sostanze potenzialmente infettive utilizzate con questo sistema.

                  Attenzione: maneggiare le cartucce con attenzione; i bordi del sigillo possono essere taglienti.

    Informazioni aggiuntive: I componenti del Maxwell® CSC DNA FFPE Kit sono qualificati e comprovati per
    funzionare insieme.  Non è consigliato il mescolamento dei componenti di un kit tra lotti di kit differenti. Usare
                     5295MA.eps
    solo i componenti forniti nel kit.

2   Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399 USA · Numero verde per gli USA 800-356-9526 · 608-274-4330 · Fax 608-277-2516
    TM395 · Revisione 5/18                                                                                                         www.promega.com
Legenda dei simboli

              Simbolo                        Spiegazione                  Simbolo                                   Spiegazione
                                             Dispositivo medico-                                                    Mandatario nella
                           6008TA

                                                                                                           6006TA
                                             diagnostico in vitro                                                   Comunità Europea

                        30°C
                                             Conservare a
                                                                                                                    Fabbricante
                                             15-30°C.
                                    6010TB

       15°C
                                                                          2800 Woods Hollow Rd.
                                                                           Madison, WI USA

                                             Attenzione                                                             Irritante

                                                                                                                    Contenuto sufficiente
                                             Cancerogeno
                                                                                                                    per “n” test

                                                                    5295MA.eps
                                             Conformità alle                                                        Avvertenza.
                                             normative europee                                                      Rischio biologico.
                                                                                                  6422MA

                                             Avvertenza. Pericolo                                                   Ri fer imento di
                                             di schiacciamento.                                                     Catalogo

                                             Codice di lotto                                                        Non riutilizzare

  3.      Uso previsto del prodotto
  Maxwell® CSC DNA FFPE Kit è destinato all’uso come dispositivo medico-diagnostico in vitro (IVD) per
  l’isolamento automatico del DNA da campioni di tessuto umano FFPE (fissato in formalina e incluso in paraffina)
  provenienti da mammella, polmone o colon, in combinazione con Maxwell® CSC Instrument e il metodo di
  purificazione Maxwell® CSC DNA FFPE. Il DNA purificato è adatto per l’impiego in analisi diagnostiche in vitro
  basate sull’amplificazione.
  Maxwell® CSC DNA FFPE Kit è previsto per un impiego ad una temperatura ambiente compresa tra 15°C e 30°C.
  L’impiego al di fuori di questi valori può comportare risultati non ottimali.

Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399 USA · Numero verde per gli USA 800-356-9526 · 608-274-4330 · Fax 608-277-2516   3
www.promega.com                                                                                                             TM395 · Revisione 5/18
I campioni FFPE preparati con formalina 10% neutra tamponata possono essere impiegati con il Maxwell® CSC
    DNA FFPE Kit.
    Maxwell® CSC DNA FFPE Kit non deve essere utilizzato come parte di uno specifico test diagnostico.
    Maxwell® CSC DNA FFPE Kit è destinato ad un uso esclusivamente professionale. I risultati diagnostici ottenuti
    utilizzando il DNA purificato grazie a questo sistema devono essere interpretati congiuntamente ad altri esami
    clinici o di laboratorio.

    4.     Limitazioni all’utilizzo del prodotto
    Maxwell® CSC DNA FFPE Kit è destinato esclusivamente all’uso con campioni di tessuto FFPE prelevati da
    mammella, polmone o colon umani. Non deve essere utilizzato con campioni di tessuti non FFPE, quali campioni
    di tessuto freschi o congelati, o con campioni di tessuto FFPE prelevati da tessuti umani non originanti da
    mammella, polmone o colon. Maxwell® CSC DNA FFPE Kit non deve essere utilizzato con altri tipi di campioni,
    inclusi campioni non umani, o per la purificazione di RNA.
    Maxwell® CSC DNA FFPE Kit non deve essere utilizzato con campioni di tessuto che siano stati preparati con
    fissativi diversi dalla formalina 10% neutra tamponata.
    Le prestazioni di Maxwell® CSC DNA FFPE Kit sono state valutate isolando il DNA da campioni di tessuto FFPE
    di dimensioni comprese tra 0,1 e 2,0 mm3. Non deve essere utilizzato con campioni di dimensioni al di fuori di
    questi valori.
    L’utilizzatore è responsabile della definizione delle caratteristiche delle prestazioni necessarie per le applicazioni
    diagnostiche a valle. Qualsiasi applicazione diagnostica a valle che utilizzi DNA purificato con Maxwell® CSC DNA
    FFPE Kit deve includere idonei controlli.

    5.     Prima di iniziare

    Fornitura materiali a cura dell’utente
    •      microcentrifuga
    •      pipette e puntali per il trasferimento del campione di pre-elaborazione nelle cartucce preriempite di
           reagente
    •      provette da 1,5–2,0 ml per l’incubazione dei campioni (ad esempio, Microtubes, 1,5 ml [Cat. n. V1231])
    •      blocchi di riscaldamento a 56°C e a 80°C (nota: il blocco di riscaldamento deve essere alla temperatura
           richiesta. La temperatura effettiva del blocco di riscaldamento dovrà essere misurata tenendo conto delle
           specifiche di calibrazione del termometro usato per la misurazione)
    •      campioni FFPE con un volume di tessuto totale da 0,1 a 2,0 mm3 (nota: i campioni devono essere
           conservati a temperatura ambiente [15–30°C])
    •      lamette da barba (nota: fare attenzione durante l’utilizzo delle lamette per raschiare il tessuto dal vetrino)

                     5295MA.eps

4   Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399 USA · Numero verde per gli USA 800-356-9526 · 608-274-4330 · Fax 608-277-2516
    TM395 · Revisione 5/18                                                                                                         www.promega.com
5.A. Preparazione dei campioni FFPE

  Pre-elaborazione dei campioni della sezione
  1.      Porre la sezione in una provetta per microcentrifuga da 1,5 ml. Se si impiegano sezioni di tessuto montate
          su vetrino, raschiare la sezione dal vetrino tramite una lametta da barba pulita.
  2.      Aggiungere 300 µl di olio minerale alle provette del campione. Mescolare tramite agitatore per 10 secondi.
  3.      Scaldare i campioni a 80°C per 2 minuti. Riporre i campioni a temperatura ambiente durante la
          preparazione della master mix.
  4.      Preparare una master mix di tampone di lisi, Proteinasi K e colorante blu come mostrato di sotto.
                                                                                   Reazioni
           Reagente                      Quantità/reazione             (numero di corse da eseguire + 1)                               Totale
           Tampone di lisi                       224 µl                                     n+1                             224 × (n + 1) µl
           Proteinasi K                            25 µl                                    n+1                               25 × (n + 1) µl
           Colorante blu                            1 µl                                    n+1                                1 × (n + 1) µl
  5.      Aggiungere 250 µl di master mix a ciascuna provetta di campione e mescolare tramite agitatore per
          5 secondi.
  6.      Centrifugare a 10.000 × g per 20 secondi per separare gli strati. Se lo strato acquoso (strato blu inferiore)
          contiene un pellet, mescolare delicatamente la fase acquosa con una pipetta.
  7.      Trasferire le provette di campione nel blocco di riscaldamento a 56°C e incubare per 30 minuti.
  8.      Trasferire le provette di campione nel blocco di riscaldamento a 80°C e incubare per 4 ore.
  9.      Trasferire le provette di campione al banco di prova e lasciar raffreddare il campione a temperatura
          ambiente per 5 minuti.
  10.     Aggiungere 10 µl di RNasi A a ciascuna provetta di campione. Mescolare pipettando.
  11.     Incubare per 5 minuti a temperatura ambiente (15–30°C).
  12.     Centrifugare alla massima velocità in una microcentrifuga per 5 minuti.
  13.     Trasferire immediatamente la fase acquosa blu contenente il DNA nella camera n.1 della cartuccia Maxwell®
          FFPE Cartridge prima del passaggio 5 della Sezione 6.

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5.B. Preparazione della cartuccia Maxwell® FFPE Cartridge
    1.     Cambiare guanti prima di maneggiare cartucce Maxwell® FFPE Cartridge, stantuffi CSC/RSC e provette
           di eluizione. Le cartucce vengono preparate nell’apposito vassoio Maxwell® CSC Deck Tray rimosso
           dallo strumento; il vassoio contenente le cartucce ed i campioni viene trasferito nello strumento per la
           purificazione. Porre le cartucce da impiegare nel vassoio Maxwell® CSC Deck Tray (figura 2). Porre ciascuna
           cartuccia nel vassoio con la camera n.1 (la camera più ampia della cartuccia) al massimo della distanza dalle
           provette di eluizione. Premere sulla cartuccia fino a quando scatterà in posizione. Assicurarsi che ambedue
           le estremità della cartuccia siano completamente inserite nel vassoio. Staccare delicatamente il sigillo in
           modo che venga completamente rimosso dalla parte superiore della cartuccia. Prima di posizionare le
           cartucce nel vassoio, assicurarsi che siano stati rimossi il nastro sigillante e qualunque residuo di adesivo.
           Attenzione: maneggiare le cartucce con attenzione. I bordi del sigillo possono essere taglienti.
    2.     Posizionare uno stantuffo nella camera n.8 di ciascuna cartuccia.
           Nota: usare esclusivamente gli stantuffi a corredo di Maxwell® CSC FFPE Kit. Gli stantuffi dei kit Maxwell®
                     5295MA.eps
           16 LEV e SEV non sono compatibili con Maxwell® CSC Instrument.
    3.     Porre nell’apposita posizione una provetta di eluizione vuota per ciascuna cartuccia nel vassoio Maxwell®
           CSC Deck Tray.
           Nota: usare esclusivamente le provette di eluizione a corredo di Maxwell® CSC DNA FFPE Kit. Altre
           provette di eluizione possono non essere compatibili con Maxwell® CSC Instrument e interferire con la
           purificazione del DNA.
    4.     Aggiungere 50 µl di acqua priva di nucleasi sul fondo di ciascuna provetta di eluizione.
           Nota: usare esclusivamente l’acqua priva di nucleasi a corredo di Maxwell® CSC DNA FFPE Kit. L’impiego
           di altri tamponi di eluizione possono interferire con la purificazione del DNA.
           Note sulla preparazione della cartuccia Maxwell® FFPE Cartridge
           1.     Se si stanno elaborando meno di 16 campioni, disporre le cartucce in modo uniforme a partire dal
                  centro del vassoio.
           2.     Pulire fuoriuscite di campione o reagente su qualunque parte del vassoio Maxwell® CSC Deck Tray
                  come indicato nel manuale operativo del Maxwell® CSC Instrument. Non usare candeggina su
                  nessuna parte dello strumento.
                         5295MA.eps

6   Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399 USA · Numero verde per gli USA 800-356-9526 · 608-274-4330 · Fax 608-277-2516
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1.
                                                                              1. Tampone    legante
                                                                                 Binding Buffer
                                                                              2.
                                                                              2. Particelle magnetiche
                                                                                 Magnetic Particles
                                            1                                 3.
                                                                              3. Soluzione   di lavaggio
                                                                                 Wash Solution
                                                2                             4. Soluzione
                                                                              4. Wash Solution
                                                                                             di lavaggio
                                                    3                         5. Soluzione
                                                                                 Wash Solution
                                                        4                     5.             di lavaggio
                                                            5                 6. Soluzione
                                                                              6. Wash Solution
                                                                                             di lavaggio
                                                                6             7. Empty
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                                                                        8     8. Empty
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                                                                             Well Content User Adds:
                                                                            Contenuti  cameresample
                                                                             1. Preprocessed   aggiunti dall’utente:
                                                                             8. Campione
                                                                             1. CSC/RSC Plunger
                                                                                           pre-elaborato
                                                                             8. Stantuffo CSC/RSC
                                  11339TC

  Figura 1. Cartuccia Maxwell® FFPE Cartridge. Questa figura mostra il contenuto di una cartuccia.
  Il campione FFPE pre-elaborato viene aggiunto alla camera n.1; uno stantuffo viene aggiunto alla camera n.8.

                                                                                                         10828TB

  Figura 2. Preparazione e allestimento del vassoio Maxwell® CSC Deck Tray. Acqua priva di nucleasi
  viene aggiunta alle provette di eluizione come indicato.

  6.      Corsa dello strumento
  Il metodo Maxwell® CSC FFPE può essere scaricato dal sito web Promega: www.promega.com/resources/
  tools/maxwellcscmethod. Vedere il manuale tecnico per l’installazione dei metodi Maxwell® CSC n.TM401 per
  maggiori informazioni.
  1.      Accendere Maxwell® CSC Instrument e il Tablet PC. L’interfaccia utente dello strumento si avvierà
          automaticamente; lo strumento procederà ad un’auto-verifica e tutte le parti mobili verranno portate nella
          posizione base.
  2.      Selezionare “Avvia” nella schermata Home.

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6.     Corsa dello strumento (continua)
    3.     Leggere o digitare il codice a barre del metodo dell’etichetta di Maxwell® CSC DNA FFPE Kit per
           selezionare automaticamente il metodo da seguire (figura 3).
           Nota: il codice a barre del metodo di Maxwell® CSC DNA FFPE Kit è necessario per la purificazione del
           DNA con Maxwell® CSC Instrument. L’etichetta del kit contiene due codici a barre. Il codice a barre del
           metodo è indicato nella sottostante figura 3. Se il codice a barre non è leggibile, contattare l’assistenza
           tecnica Promega.

                                                                                                    11588TA
    Figura 3. Etichetta del kit con l’indicazione del codice a barre del metodo da leggere. Il riquadro rosso
    mostra il codice a barre del metodo da leggere sull’etichetta del kit per avviare una corsa di purificazione.
    4.     Selezionare le posizioni di cartuccia da eseguire (vedere il manuale operativo del Maxwell® CSC
           Instrument) e leggere o inserire manualmente i necessari dati di tracciabilità del campione. Deselezionare
           le posizioni non utilizzate. Selezionare “Procedi” quando pronti.
    5.     Verificare che: i campioni siano stati aggiunti alla camera n.1 delle cartucce (secondo le istruzioni della
           Sezione 5.A), le cartucce siano caricate sullo strumento, le provette di eluizione contenenti 50 μl di acqua
           priva di nucleasi siano presenti e gli stantuffi siano posti nella camera n.8.
    6.     Trasferire il vassoio Maxwell® CSC Deck Tray contenente le cartucce preparate sull’apposito piano di
           Maxwell® CSC Instrument. Assicurarsi che il vassoio sia posizionato nel Maxwell® CSC Instrument con le
           provette di eluizione più vicine allo sportello. Il vassoio si posizionerà correttamente nello strumento solo
           con questo orientamento. Se si riscontrano difficoltà nel posizionare il vassoio sulla piattaforma, verificare
           che sia orientato correttamente. Assicurarsi che il vassoio sia in piano sullo strumento.
           Nota: tenere il vassoio Maxwell® CSC Deck Tray dai lati per evitare di spostare le cartucce dal rack.
           Avvertenza: pericolo di schiacciamento.
    7.     Confermare che tutti i passaggi di pre-elaborazione sono stati eseguiti e toccare “Avvia” per chiudere lo
           sportello dello strumento e avviare l’elaborazione.

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8.      Maxwell® CSC Instrument inizierà immediatamente la corsa di purificazione. La schermata visualizzerà i
          passaggi eseguiti e una stima del tempo rimanente per la fine della corsa.
          Nota: se la corsa viene interrotta prima del completamento, lo strumento laverà via le particelle dagli
          stantuffi e li espellerà nella camera n.8 della cartuccia. I campioni andranno persi. Non cercare di
          ripurificare campioni dei quali sia stata interrotta una corsa dello strumento.
  9.      Una volta completata la corsa automatica di purificazione, la schermata del Tablet PC segnalerà tramite un
          messaggio che il metodo è stato completato. “Fine della corsa”.
  Fine della corsa
  10.     Seguire le istruzioni a schermo al termine del metodo per aprire lo sportello. Verificare che gli stantuffi
          si trovino nella camera n.8 della cartuccia al termine della corsa. Rimuovere il vassoio dallo strumento e
          togliere dal vassoio i campioni eluiti. Se gli stantuffi non sono stati tutti rimossi dalla barra degli stantuffi:
          seguire le istruzioni a schermo per eseguire il metodo di pulizia per una corsa interrotta; in alternativa,
          selezionare il metodo di pulizia dalla schermata Impostazioni per fare in modo che una prova andata a buon
          fine rimuova gli stantuffi rimanenti.
  11.     Tappare e rimuovere le provette di eluizione contenenti DNA subito dopo la corsa per evitare l’evaporazione
          degli eluati. Rimuovere il vassoio Maxwell® CSC Deck Tray dallo strumento.
          Nota: dopo una procedura di purificazione automatica, il vassoio Maxwell® CSC Deck Tray può essere
          caldo. Per rimuovere il rack dalla piattaforma dello strumento, tenerlo dai suoi lati.
          Assicurarsi che i campioni siano rimossi dallo strumento prima di igienizzare tramite UV per evitare di
          danneggiare l’acido nucleico purificato.
  12.     Rimuovere le cartucce e gli stantuffi dal vassoio Maxwell® CSC Deck Tray e smaltirli come rifiuti pericolosi
          secondo le procedure in vigore presso la propria struttura. Cartucce, stantuffi e provette di eluizione devono
          essere utilizzati una sola volta. Non riutilizzare cartucce Maxwell® FFPE Cartridge, stantuffi CSC/RSC o
          provette di eluizione.

  7.      Post-purificazione
  Stabilisce se la resa del campione di DNA purificato è conforme ai requisiti di ingresso dell’analisi diagnostica a
  valle prima di impiegarlo in tale analisi. Le prestazioni del kit sono state valutate sulla base della purificazione di
  DNA amplificabile. Altri mezzi di quantizzazione, quali l’assorbanza o il legame di colorante fluorescente, possono
  non correlare con l’amplificazione (1). Le letture di assorbanza per campioni FFPE purificati possono sovrastimare
  la resa; si raccomanda l’utilizzo di altri metodi per la determinazione di quest’ultima (1).

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8.     Risoluzione dei problemi
     Per domande non specificamente trattate nel presente manuale, rivolgersi al rappresentante o alla filiale
     Promega locale. Le informazioni relative ai contatti sono disponibili all’indirizzo: www.promega.com.
     e-mail: it_techserv@promega.com.

     Problema                                                            Cause e commenti
     Concentrazioni di DNA nell’eluato inferiori alle                    Le prestazioni del kit sono state valutate isolando il DNA
     attese                                                              da campioni di tessuto FFPE di dimensioni comprese tra
                                                                         0,1 e 2,0 mm3. Non è stato progettato per campioni al di
     Una sezione FFPE tipica deve produrre DNA                           fuori di questi valori. Usare sezioni che rientrino in
     amplificabile in funzione di: dimensioni e cellularità              questo intervallo.
     del tessuto, condizioni di fissaggio in formalina e                 Il kit è stato progettato per l’uso con campioni di tessuto
     maneggiamento.                                                      FFPE prelevati da mammella, polmone o colon umani.
                                                                         Non è stato progettato per l’uso con campioni di tessuti
                                                                         non FFPE, quali campioni di tessuto freschi o congelati,
                                                                         o con campioni di tessuto FFPE prelevati da tessuti
                                                                         umani non originanti da mammella, polmone o colon. I
                                                                         tempi e le temperature di incubazione sono stati testati
                                                                         esclusivamente per mammella, polmone e colon umani.
                                                                         Il kit non è stato progettato per l’uso con campioni di
                                                                         tessuto che siano stati preparati con fissativi diversi dalla
                                                                         formalina 10% neutra tamponata. Controllare con il
                                                                         laboratorio di patologia o con il venditore che non siano
                                                                         stati utilizzati fissativi alternativi.
                                                                         Nessuna prerogativa è valida per vetrini o sezioni
                                                                         macchiati. Ripetere la purificazione con vetrini o sezioni
                                                                         non macchiati.
                                                                         Le prestazioni del kit sono state valutate sulla base della
                                                                         purificazione di DNA amplificabile. Altri mezzi di
                                                                         quantizzazione, quali l’assorbanza o il legame di
                                                                         colorante fluorescente, possono non correlare con
                                                                         l’amplificazione. Usare una quantizzazione
                                                                         dell’amplificazione per valutare la purificazione.

10   Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399 USA · Numero verde per gli USA 800-356-9526 · 608-274-4330 · Fax 608-277-2516
     TM395 · Revisione 5/18                                                                                                         www.promega.com
Problema                                                                  Cause e commenti
  Qualità inferiore alle attese                                             La sezione di tessuto usata per la purificazione può
                                                                            includere DNA frammentato a causa delle condizioni di
  L’eluato contiene DNA fortemente frammentato o                            fissaggio in formalina o del maneggiamento. Se il DNA è
  inibitori dell’analisi a valle.                                           frammentato prima della purificazione di estrazione, il
                                                                            kit purificherà DNA frammentato. Ripetere su una
                                                                            sezione adiacente per stabilire se il problema è inerente
                                                                            alla sezione o al processo.
                                                                            Alcune analisi basate sull’amplificazione sono
                                                                            particolarmente sensibili alla presenza di inibitori.
                                                                            I controlli delle analisi a valle dovranno identificare la
                                                                            presenza di un inibitore di amplificazione nell’eluato.
                                                                            È responsabilità dell’utente verificare la compatibilità di
                                                                            questo prodotto con l’analisi a valle.

  9.         Bibliografia
  1.         Bonin, S. et al. (2010) Multicentre validation study of nucleic acids extraction from FFPE tissues. Virchows
             Arch. 457, 309–17.

  10.        Riepilogo delle modifiche
  Le modifiche seguenti sono state implementate alla revisione del 5/18 di questo documento:
  1.         Aggiornato per includere i requisiti della Direttiva UE 98/79/CE sui dispositivi medicali per diagnosi
             in vitro.

  (a)
        Brevetti USA n. 6.027.945, 6.368.800 e 6.673.631, brevetti europei n. 0895546, 1367137 e 1204741, brevetti giapponesi n. 3253638 e 4425513.
  © 2013 -5, 2018 Promega Corporation. Tutti i diritti riservati.
  Maxwell è un marchio registrato di Promega Corporation.
  I prodotti possono essere coperti da brevetti già rilasciati o in corso di rilascio o possono essere soggetti a determinate limitazioni. Per ulteriori
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